[发明专利]基于反向遗传操作的PEDV嵌合病毒致弱的鉴定方法及筛选潜在弱毒疫苗的应用在审
| 申请号： | 202210831910.9 | 申请日： | 2022-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN115852042A | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 韩军;王晨;王迪;李劼;杨汉春;盖新娜;周磊;张永宁;郭鑫;高鹏 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6841;C12Q1/6851;A61K39/225;A61P31/14;A01K67/02;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京兴智翔达知识产权代理有限公司 11768 | 代理人： | 郭卫芹 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 反向 遗传 操作 pedv 嵌合 病毒 鉴定 方法 筛选 潜在 疫苗 应用 | ||
1.一种基于反向遗传操作的PEDV嵌合病毒致弱的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、首先以CHM2013为骨架，构建和拯救分别置换BJ2011C结构蛋白编码区和S蛋白的嵌合病毒CHM2013-SPBJ和CHM2013-SBJ；再以CHM2013-SPBJ为骨架，构建和拯救分别置换CHM2013结构蛋白的嵌合病毒CHM2013-SPBJ-ORF3CHM、CHM2013-SPBJ-ECHM、CHM2013-SPBJ-MCHM和CHM2013-SPBJ-NCHM，进行功能丧失性试验，探究PEDV变异株BJ2011C S蛋白和其它结构蛋白协同促进致病的分子基础；
S2、以2日龄SPF仔猪为模型，口服5×105TCID50的嵌合病毒CHM2013-SPBJ、CHM2013-SPBJ-ORF3CHM、CHM2013-SPBJ-ECHM、CHM2013-SPBJ-MCHM和CHM2013-SPBJ-NCHM进行功能丧失性试验，通过临床情况、每日排毒情况、肠道病理变化和肠道定殖情况分析嵌合病毒对仔猪的致病性，结果显示，与CHM2013-SPBJ相比，CHM2013-SPBJ-NCHM致病性没有减轻；CHM2013-SPBJ-MCHM和CHM2013-SPBJ-ECHM的致病性有所降低；CHM2013-SPBJ-ORF3CHM丧失了致病性；得到PEDV变异株S基因协同结构蛋白ORF3、E和M促进病毒致病，其中S基因协同ORF3促进致病最关键；
S3、根据功能丧失性试验结果，以CHM2013-SBJ为骨架，构建和拯救置换BJ2011CORF3的嵌合病毒CHM2013-(S+ORF3)BJ，进行功能获得性试验，进一步探究S蛋白和ORF3协同促进致病的分子基础；
S4、以2日龄SPF仔猪为模型，口服5×105TCID50的嵌合病毒CHM2013-SBJ和CHM2013-(S+ORF3)BJ，通过临床情况、每日排毒情况、肠道病理变化和肠道定殖情况分析嵌合病毒对仔猪的致病性，进一步确定高毒力毒株BJ2011C S基因和结构蛋白ORF3是否协同促进病毒致病，结果显示，CHM2013-(S+ORF3)BJ的致病性高于CHM2013-SBJ，得到PEDV变异株BJ2011C S基因协同结构蛋白ORF3促进病毒致病。
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