[发明专利]一种基于SH2超亲体的融合蛋白及应用

说明书

本发明涉及一种基于SH2超亲体的融合蛋白及应用，属于生物技术领域。本发明融合蛋白含有慢性粒细胞白血病细胞特异性穿膜肽，还含有SH2超亲体，所述慢性粒细胞白血病细胞特异性穿膜肽与所述SH2超亲体连接。本发明是基于白血病细胞靶向穿膜肽及SH2超亲体两方面的优势，制备“白血病细胞靶向穿膜肽CAYHRLRRC‑SH2超亲体”融合蛋白，即CR‑sSH2融合蛋白，作为治疗CML的靶向候选药物，该融合蛋白既具有白血病细胞靶向穿膜肽CAYHRLRRC的特异性识别白血病细胞的功能，CAYHRLRRC多肽还可以帮助将SH2超亲体导入到细胞内，进入细胞内的SH2超亲体可取代天然的SH2结构域与多个酪氨酸磷酸化位点相结合，进而阻断与细胞增殖、凋亡有关的信号通路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及一种基于SH2超亲体的融合蛋白及应用，尤其涉及对蛋白质的磷酸化酪氨酸残基(phosphotyrosine，pY)具有强亲和力的蛋白多肽，涉及基因重组及原核载体融合蛋白的表达纯化等，尤其是一种CR-sSH2融合基因及其原核表达载体的应用。

背景技术

一、慢性粒细胞白血病治疗现状

慢性粒细胞白血病(Chronic myelocytic leukemia，CML)是一种起源于造血干细胞的恶性血液疾病，约占成人白血病的20％。《成人慢性粒细胞白血病诊疗规范(2019年版)》报道，CML的全球年发病率约为(1.6-2)/10万人，我国年发病率约为(0.36-0.55)/10万人。随着年龄增加，CML发病率有逐步上升的趋势，严重危害人类健康。患者通常出现血中粒细胞比例极度增高并伴随出现未成熟粒细胞、贫血、脾肿大等临床症状，一般为体检过程中偶然发现并通过染色体核型分析而确诊。现有数据统计表明，超过95％的病人的造血细胞中存在费城(Ph)染色体，该染色体的出现是由于人9号染色体上的癌基因c-abl易位到22号染色体bcr基因处，即出现平衡交互异位(t9，22)(q34，q11)，形成了融合基因bcr-abl。该基因可编码具有持续酪氨酸激酶活性的融合蛋白BCR-ABL，使细胞内多条相关通路被激活，导致细胞异常增殖、细胞凋亡能力受阻、细胞间粘附力下降及DNA修复异常，促使CML的发生与发展。

现有的治疗慢性粒细胞白血病的主要方式为酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosinekinase inhibitors，TKIs)，其中应用最为广泛的伊马替尼(Imatinib)于2001年被美国FDA批准用来治疗CML，一年后成为治疗CML的一线药物，使CML患者的10年生存率达85％-90％。但在延长患者生存期的同时，也伴随着不耐受及多重耐药的出现。由此研发出的二代酪氨酸激酶抑制剂，例如尼罗替尼(Nilotinib)和达沙替尼(Dasatinib)等TKIs作为一线治疗药物，对BCR-ABL的抑制能力更强，能够获得更快更深的分子学反应。虽然对大部分伊马替尼耐药的患者有一定疗效，但其作用仍然具有一定的局限性，如对ABL-T315I突变患者的治疗效果并不显著。氟马替尼(Flumatinib)作为国内首款二代TKI，从分子结构来看是伊马替尼的升级版，且疗效更好，但其不良反应率和伊马替尼大致相似。伴有T315I突变的CML患者对目前所有一代、二代BCR-ABL抑制剂均耐药，因此临床上亟需可有效治疗伴有T315I突变的CML的第三代BCR-ABL抑制剂。奥瑞巴替尼(GZD824，HQP1351)是全球第二个、国产第一个口服第三代TKI抑制剂，先后被中国药监局纳入优先审评和突破性治疗品种，也被美国FDA授予快速通道资格及孤儿药资格，能够靶向性的针对野生型BCR-ABL及其T315I突变，能够克服一二代BCR-ABL抑制剂的临床耐药问题。然而，TKIs仅作用于分化的癌细胞却不能消除白血病干细胞，故而病灶不能完全清除，且其昂贵的售价也使很多家庭无力承担。除了TKIs，异基因造血干细胞移植(Allo SCT)也曾是治疗CML的主要方法，但是其应用条件十分苛刻，与患者的年龄、供体、病程进展及经济状况均有关系，同时术后可能还会面临严重的免疫排斥反应，逐步变成了TKIs治疗失败或者不耐受后的二线甚至三线治疗选择。因此，寻求多靶点、不易产生耐药性且成本较低的药物对CML的治疗十分重要。

二、磷酸化酪氨酸和SH2超亲体及其抗肿瘤应用概述