[发明专利]一种耐高温木聚糖酶突变体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种耐高温木聚糖酶突变体，其特征在于，通过对木聚糖酶HwXyl10A为母本进行位点突变，得到的突变体；所述位点为Asn318或Asp372，所得突变体分别记为高比活耐热木聚糖酶突变体D318W或高比活耐热木聚糖酶突变体N372L。

2.如权利要求1所述的耐高温木聚糖酶突变体，其特征在于，所述木聚糖酶HwXyl10A的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述D318W的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述N372L的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.如权利要求2所述的耐高温木聚糖酶突变体，其特征在于，编码木聚糖酶HwXyl10A的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，编码高比活耐热木聚糖酶突变体D318W的核苷酸序列如SEQ ID NO.5，编码高比活耐热木聚糖酶突变体N372L的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.一种重组载体，其特征在于，含有编码权利要求1所述的突变体的核苷酸序列。

5.一种重组菌株，其特征在于，表达权利要求4所述的重组载体的菌株。

6.基于权利要求1-3任一项所述的耐高温木聚糖酶突变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：以野生型木聚糖酶重组表达质粒pic9r_ HwXyl10a为模板，利用特异性引物采用定点突变方法扩增木突变体线型重组质粒pic9r_N318W和pic9r_D372L；

步骤2：将突变重组载体转化毕赤酵母Gs115，甲醇诱导表达，获得突工程菌株，优选为Gs115/N318W和Gs115/ D372L；

步骤3：发酵培养毕赤酵母重组菌株，诱导重组木聚糖酶表达；

步骤4：回收并纯化所表达的高比活耐热木聚糖酶突变体N318W和D372L。

7.如权利要求6所述的耐高温木聚糖酶突变体的制备方法，其特征在于，所述毕赤酵母为毕赤酵母GS115。

8.基于权利要求1或权利要求6所述的耐高温木聚糖酶突变体在制备饲料或利用生物质降解木聚糖产糖中的应用。