[发明专利]可溶性表达的重组蛋白rP22、杂交瘤细胞株及其应用在审
| 申请号： | 202210854769.4 | 申请日： | 2022-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN115724991A | 公开（公告）日： | 2023-03-03 |
| 发明（设计）人： | 赵东明;步志高;朱远茂;李芳;孙恩成 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K14/01;C12N5/20;C12N15/70;C07K16/08;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58 |
| 代理公司： | 北京象合知识产权代理事务所(普通合伙) 11893 | 代理人： | 郑慧娟;封明艳 |
| 地址： | 150000 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 可溶性 表达 重组 蛋白 rp22 杂交瘤 细胞株 及其 应用 | ||
1.一种可溶性表达的重组蛋白rP22，其特征在于：所述的可溶性表达的重组蛋白rP22为重组质粒pMAL-C5x-p22经诱导表达获得重组p22蛋白。
2.一种可溶性表达的重组蛋白rP22的制备方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤，
S101构建P22重组质粒：根据Pig/HLJ/2018 ASFV分离株全基因组序列设计引物，并以此毒株基因组为模板，采用PCR方法扩增获得534bp的p22基因；上下游引物分别引入NdeI和HindIII酶切位点；通过酶切、连接手段，将p22基因克隆至pMAL-C5x载体，获得重组质粒pMAL-C5x-p22；
S102重组P22蛋白的表达及纯化：重组质粒pMAL-C5x-p22转化ER2523感受态，挑取单个菌落，诱导表达获得重组蛋白rP22。
3.根据权利要求2所述的一种可溶性表达的重组蛋白rP22的制备方法，其特征在于：步骤S101所述的引物序列如下，
引物名称 引物序列 P22F 5’-CATATGATGTTTAATATTAAAATGACAATTTCTACATTGCTTATTGCTC-3’ P22R 5’-AAGCTTTTATGCATGTTTATGATTTCTAGGTAAGGCTATGATGTGATCC-3’
。
4.根据权利要求2所述的一种可溶性表达的重组蛋白rP22的制备方法，其特征在于：步骤S101所述的重组质粒pMAL-C5x-p22带有标签蛋白；所述的标签蛋白为麦芽糖结合蛋白。
5.根据权利要求2所述的一种可溶性表达的重组蛋白rP22的制备方法，其特征在于：步骤S102所述的诱导表达所用诱导剂为IPTG，使用量为1mM。
6.根据权利要求2所述的一种可溶性表达的重组蛋白rP22的制备方法，其特征在于，所述的方法还包括对重组蛋白rP22进行亲和纯化；利用麦芽糖结合蛋白标签对rP22亲和纯化。
7.分泌抗ASFV单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于：所述的杂交瘤细胞株为保藏号为CCTCC NO:C202222；
所述的杂交瘤细胞株可以分泌以rP22蛋白为筛选抗原，采用间接ELISA方法筛选获得特异性单克隆抗体。
8.含有权利要求7所述的单克隆抗体的试剂盒。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括试剂、试剂盒、试纸条或生物芯片。
10.权利要求8所述的单克隆抗体或权利要求9所述的试剂盒在制备检测ASFV试剂盒中的应用。
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