[发明专利]一种获得目标蛋白的方法、融合蛋白、载体及应用

权利要求书

1.一种获得目标蛋白的方法，其特征在于，包括：

用包含编码目标蛋白的核酸的表达载体转化大肠杆菌细胞，培养所述大肠杆菌细胞的步骤；

其中，所述目标蛋白以形成融合蛋白的形式进行表达，所述融合蛋白包含：

目标蛋白；

在N末端的S标签；以及

在C末端的靶向序列，所述靶向序列使所述融合蛋白靶向至大肠杆菌细胞胞外域。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶向序列包含溶血素A信号肽。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白还包含选自His标签、GST标签、Strep标签和MBP标签中任意一种或多种标签序列，所述标签序列位于所述目标蛋白与所述靶向序列之间。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述标签序列为两个，分别位于所述目标蛋白与所述靶向序列之间，以及所述S标签与所述目标蛋白之间。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白还包含两个分别位于在所述目标蛋白的N端和C端的蛋白酶识别序列。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶识别序列选自TEV蛋白酶识别序列、凝血酶识别序列、肠激酶识别序列、3C蛋白酶识别序列和内含肽中的至少一种。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：

收集并纯化培养液上清，使纯化后的所述培养液上清与蛋白酶接触，以便获得游离的目标蛋白，其中所述蛋白酶基于所述蛋白酶识别序列确定。

8.一种适于胞外分泌表达的融合蛋白，其特征在于，包含：

目标蛋白；

在N末端的S标签；以及

在C末端的靶向序列，所述靶向序列使所述融合蛋白靶向至大肠杆菌细胞胞外域的靶向序列。

9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，所述靶向序列包含溶血素A信号肽。

10.根据权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，还包含选自His标签、GST标签、Strep标签和MBP标签中任意一种或几种的标签序列，所述标签序列位于所述目标蛋白与所述靶向序列之间。

11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其特征在于，所述标签序列为两个，分别位于所述目标蛋白与所述靶向序列之间，以及所述S标签与所述目标蛋白之间。

12.根据权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，还包含两个分别位于在所述目标蛋白的N端和C端的蛋白酶识别序列。

13.根据权利要求12所述的融合蛋白，其特征在于，所述蛋白酶识别序列选自TEV蛋白酶识别序列、凝血酶识别序列、肠激酶识别序列、3C蛋白酶识别序列和内含肽中的至少一种。

14.一种表达载体，其特征在于，包含编码权利要求8-13任一项所述的融合蛋白的核酸。

15.权利要求1-7任一项所述的获得目标蛋白的方法在目标蛋白活性检测、亲和力检测或突变体筛选中的应用。