[发明专利]一种用于诊断痒螨病的PCR试剂盒及检测方法

权利要求书

1.痒螨的ITS2、16S、12S和COX1基因序列在制备诊断痒螨病试剂盒中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述基因序列为ITS2、12S。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述基因序列为ITS2。

4.一种用于诊断痒螨病的PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括特异性引物，所述特异性引物可与痒螨的ITS2，和/或12S，和/或16S，和/或COX1基因序列特异性结合；

其中，针对ITS2基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:2所示；

针对12S基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:4所示；

针对16S基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:5-SEQ ID NO:6所示；

针对COX1基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:7-SEQ ID NO:8所示。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中特异性引物为针对ITS2基因的特异性引物序列，和/或针对12S基因的特异性引物序列。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中特异性引物为针对ITS2基因的特异性引物序列。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括DNA提取过程中的常规试剂，和/或PCR扩增反应中的常规试剂，和/或PCR扩增产物检测的常规试剂。

8.一种非诊断目的痒螨病PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待检样本的DNA；

(2)配制PCR反应体系，具体为：

(3)进行PCR扩增，程序如下：预变性95℃3min、变性95℃30s、退火50-64℃45s、延伸72℃30s进行25-35个循环，最后在72℃保持5min，4℃保存；

(4)PCR产物进行凝胶电泳。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中特异性引物加入体积为1μL，上游引物和下游引物各0.5μL。

10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR扩增程序为：预变性95℃3min、变性95℃30s、退火温度为50℃、60℃、64℃中的一种，45s、延伸72℃30s进行25个循环，最后在72℃保持5min，4℃保存。