[发明专利]一种用于诊断痒螨病的PCR试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种痒螨的ITS2、16S、12S和COX1基因序列在制备诊断痒螨病试剂盒中的用途，另外本发明公开了一种用于诊断痒螨病的PCR试剂盒，所述试剂盒中的特异性引物可与痒螨的ITS2，和/或12S，和/或16S，和/或COX1基因序列特异性结合。本发明提供的用于诊断痒螨病的定性PCR试剂盒，以及利用所述试剂盒进行痒螨病PCR检测方法的检测灵敏度高于镜检，可以更早更全面的发现早期感染的动物，具有较高的敏感性和特异性，可用于低荷载量寄生虫感染的亚临床病例和隐形感染病例的诊断，并且能够区分既发感染和现症感染。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种用于诊断痒螨病的PCR试剂盒及检测方法。

背景技术

痒螨病是由绵羊痒螨(Psoroptes ovis)寄生于草食动物和野生动物皮肤表面的一种流行于全球的常见外寄生虫病，临床上以瘙痒、结痂、皮肤增厚和脱毛为主要临床症状，给养殖业造成重大经济损失，同时威胁野生动物生存。动物一次性人工感染P.ovis后2周及以后方可出现肉眼可见的结痂临床症状，而实际生产中健康动物经接触患病动物或被螨虫所污染的媒介而感染P.ovis时，其出现肉眼可见的结痂临床症状的时间则会更长，这个周期可延长至1个月，甚至几个月。

现生产中，痒螨病的诊断手段是通过显微镜从结痂中观察到螨虫或螨卵而确诊，这种诊断方法对严重感染病例的检出率高，但亚临床感染和轻微感染的病例因无肉眼可见结痂而无法检出，而这些漏检的病例则成为动物群体中痒螨病感染的隐形传染源，最终造成动物群体中痒螨病的严重流行。此外，显微镜诊断方法要求诊断人员具有一定的寄生虫专业知识才方可识别虫体或虫卵，由此可见，显微镜的病原学诊断方法耗时，操作者需要一定的专业知识，且其对低螨虫数量感染的病例漏检。

近年，多个重组抗原的间接ELISA诊断方法被证实可用于痒螨病的亚临床感染和隐形感染病例的诊断，现已报道的血清学诊断方法中以重组丝氨酸蛋白酶抑制剂3的间接ELISA方法(rPsoSP3-iELISA)的诊断效果最佳。虽然rPsoSP3-iELISA通过检测特异性IgG可用于亚临床病例和隐形感染病例的早期诊断，但由于IgG抗体消退时间太长导致该检测方法无法区分既往感染和现症感染。

因此，有必要提供一种痒螨病的诊断方法，所述方法灵敏度高，准确度好，对操作者的要求不高，并且能够鉴别痒螨病既往感染和现症感染。

发明内容

近来，基于PCR技术的分子诊断方法被用于检测寄生虫、病毒和细菌的感染，现有技术中有关痒螨分子标记基因的研究报道主要是为了评价不同地理来源和宿主来源的痒螨种群遗传研究，目前尚未见痒螨病的分子诊断方法的研究报道。为了更高效的进行痒螨病的诊断，本发明提供一种用于诊断痒螨病的PCR试剂盒，以及一种非诊断目的痒螨病PCR检测方法。

第一方面，本发明提供一种痒螨的ITS2、16S、12S和COX1基因序列在制备诊断痒螨病试剂盒中的用途。

优选的，所述基因序列为ITS2、12S。

最优选的，所述基因序列为ITS2。

第二方面，本发明提供一种用于诊断痒螨病的PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括特异性引物，所述特异性引物可与痒螨的ITS2，和/或12S，和/或16S，和/或COX1基因序列特异性结合；

其中，针对ITS2基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:2所示；

针对12S基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:4所示；

针对16S基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:5-SEQ ID NO:6所示；

针对COX1基因的特异性引物序列如SEQ ID NO:7-SEQ ID NO:8所示。