[发明专利]一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法在审
| 申请号： | 202210861181.1 | 申请日： | 2022-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN115792239A | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 唐勇;梁家杰;滕佩君 | 申请（专利权）人： | 暨南大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N21/65 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 郭炜绵 |
| 地址： | 510632 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表面 增强 效应 crispr cas12a 联用 蛋白 检测 方法 | ||
1.一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将含有系列浓度标志蛋白的样品与适配体在缓冲液中至少孵育30分钟，得到标志蛋白结合适配体的样品，将所得样品与Cas12a蛋白、crRNA和拉曼探针至少孵育20分钟，孵育产物使用激光激发，检测其拉曼信号，识别4ATP的拉曼特征峰并分析其强度，得出标志蛋白浓度与4ATP的拉曼特征峰强度的标准曲线；
(2)将含有未知浓度标志蛋白的样品按步骤(1)的操作进行分析，得出其4ATP的拉曼特征峰强度，依据标准曲线计算样品中的标志蛋白浓度；
所述的适配体是一小段寡核苷酸序列，能够与标志蛋白特异性结合；
所述crRNA的序列与适配体互补。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的标志蛋白可以是前列腺特异抗原、SARS-CoV-2N蛋白、γ干扰素、癌胚抗原、鳞状上皮细胞癌抗原、甲胎蛋白。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的拉曼探针由表面偶联4-氨基苯硫酚(4ATP)的银纳米颗粒和表面修饰链霉亲和素的磁珠构成，两部分之间用生物素修饰的单链DNA连接。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的缓冲液为含2mM MgCl2和0.02％Tween-20的PBS，pH值7.4。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述激光的波长为785nm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述4ATP的拉曼特征峰的波长为1074cm-1。
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