[发明专利]重组腺相关病毒载体制品中游离和错误包装DNA的检测方法在审
| 申请号： | 202210864004.9 | 申请日： | 2022-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN115807064A | 公开（公告）日： | 2023-03-17 |
| 发明（设计）人： | 胡倩;闫书美;张小利;刘亚辉;吕魏魏;刘宾 | 申请（专利权）人： | 上海泰昶生物技术有限公司;上海天泽云泰生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京卓孚律师事务所 11821 | 代理人： | 谢梦欣;宋明 |
| 地址： | 200137 上海市浦东新区中国（上海）*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 相关 病毒 载体 制品 游离 错误 包装 dna 检测 方法 | ||
1.一种检测rAAV制品中游离DNA和错包DNA的含量的方法，包括：
(1)准备所述rAAV制品的两份样品：样品1和样品2；
(2)将步骤(1)中的样品1用核酸酶处理，并且步骤(1)中的样品2不用核酸酶处理，
(3)检测步骤(2)中经核酸酶处理的样品1中的杂质DNA含量，得到杂质DNA含量m；
(4)检测未经核酸酶处理的样品2中的杂质DNA含量，得到杂质DNA含量n；
(5)确定错包DNA含量为杂质DNA含量m，并确定游离DNA含量为m-n，
其中所述步骤(3)和/或(4)中的检测通过qPCR进行。
2.权利要求1所述的方法，所述杂质DNA选自：来源于制备病毒载体的宿主细胞的宿主细胞DNA(HCD)，来源于质粒的质粒DNA，或它们的组合。
3.权利要求1或2所述的方法，所述步骤(1)包括对rAAV制品进行稀释，例如用缓冲液如PBS、生理盐水或纯水进行稀释。
4.权利要求1-3中任一项所述的方法，所述步骤(2)中的核酸酶为DNA酶或全能核酸酶。
5.权利要求1-4中任一项所述的方法，所述qPCR针对来源于宿主细胞的HCD和来源于质粒的质粒DNA使用不同的特异性引物和探针。
6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中rAAV使用两质粒或三质粒系统生产，并且对于来源于不同质粒的质粒DNA使用相同的通用型特异性引物和探针，其特异性结合各种质粒中共有的序列。
7.权利要求1-5中任一项所述的方法，对于来源于质粒的质粒DNA使用特异性引物以检测特定质粒或质粒片段，例如rep基因和/或cap基因。
8.权利要求1-7中任一项所述的方法，所述rAAV制品是包含rAAV载体的组合物。
9.权利要求1-8中任一项所述的方法，所述rAAV制品是未经纯化或经过纯化的rAAV产品。
10.权利要求9中所述的方法，所述经过纯化的rAAV产品通过选自下组的方法纯化：过滤除菌、亲和纯化。
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