[发明专利]一种基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条及工作方法

权利要求书

1.一种基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条，其特征在于：所述试纸条包括双标记结合垫和设置有质控线、第一检测线及第二检测线的硝酸纤维素膜。

2.根据权利要求1所述的基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条，其特征在于：所述双标记结合垫上设置有鼠源抗体-标记载体偶联物和兔源抗体-标记载体偶联物。

3.根据权利要求2所述的基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条，其特征在于：所述鼠源抗体-标记载体偶联物包括鼠抗FITC抗体-标记载体偶联物。

4.根据权利要求2所述的基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条，其特征在于：所述兔源抗体-标记载体偶联物包括兔抗DIG抗体-标记载体偶联物。

5.根据权利要求2所述的基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条，其特征在于：所述标记载体为纳米金、纳米银、纳米碳、彩色微球和荧光微球中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条，其特征在于：所述质控线、第二检测线和第一检测线依次固定于硝酸纤维素膜上，所述质控线设置于靠近结合垫的一端，所述质控线包被有SA，所述第一检测线包被有羊抗鼠二抗，所述第二检测线包被有羊驼抗兔抗DIG纳米单抗。

7.根据权利要求1所述的基于CRISPR系统的核酸双指标快速检测试纸条，其特征在于：所述CRISPR系统设置有两种Cas蛋白、两种标记探针；

所述两种Cas蛋白分别设置有不同的可靶向待检测分子的引导序列；

所述两种标记探针为第一标记探针和第二标记探针，标记探针由核酸探针和标记物偶联而成；

所述第一标记探针为第一核酸探针与Biotin、FITC偶联而成，Biotin偶联于所述第一核酸探针的一端，FITC偶联于第一核酸探针的另一端；

所述第二标记探针为第二核酸探针与Biotin、DIG偶联而成，Biotin偶联于第二核酸探针的一端，DIG偶联于第二核酸探针的另一端。

8.权利要求1-7任一所述核酸双指标快速检测试纸条的工作方法，其特征在于：当检测样本中不存在待检测分子时，两种Cas蛋白无法被两种待检测物质激活，双标记探针无法被切割，双标记结合垫上的鼠抗FITC抗体-标记载体偶联物和兔抗DIG抗体-标记载体偶联物分别能够识别双标记探针上的FITC和DIG并结合形成完整探针标记载体复合物，并通过层析作用在硝酸纤维素膜上跑动，当经过质控线时，完整探针标记载体复合物被质控线上包被的AS捕获，无法继续层析至第一检测线和第二检测线，无法在检测线区域形成可视信号，指示样本中不存在对应的待检测分子；

当待检测样本中存在两种待检测分子时，两种Cas蛋白能够被两种待检测物质激活，进而实现对双标记探针的切割，双标记结合垫上的鼠抗FITC抗体-标记载体偶联物和兔抗DIG抗体-标记载体偶联物分别能够识别双标记探针上的FITC和DIG并结合形成切割探针标记载体复合物，并通过层析作用在硝酸纤维素膜上跑动，当经过第一检测线和第二检测线时，切割探针标记载体复合物分别被第一检测线和第二检测线上包被的羊抗鼠二抗和羊驼抗兔抗DIG纳米单抗捕获，逐渐富集至形成可视信号，指示样本中存在对应的待检测分子。