[发明专利]一种病毒抗原检测试纸的金标记垫及其检测试纸的制备方法

权利要求书

1.一种病毒抗原检测试纸的金标记垫的制备方法，其特征在于，选用了2-巯基甲基戊二酸作为修饰纳米金的材料。

2.如权利要求1所述金标记垫的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

S1.将5-15mM的2-巯基甲基戊二酸、0.05-2％的R2、0.02-0.1mM TCEP的混合液，与纳米金混合孵育；

S2.离心去上清，重悬后超声静置；

S3.离心去上清，重悬后超声悬浮得到纳米金悬浮液；

S4.将上述所得纳米金悬浮液加入MES溶液后超声清洗，离心去上清；

S5.加入MES溶液重悬上述所得沉淀，再加入偶联活化剂活化，再离心去上清，用500μLpH＝7.5的50mM HEPE超声悬浮后，加入待偶联的抗体2-8℃过夜；所述待偶联的抗体为兔IgG或新型冠状病毒N抗体；

S6.将S5所得溶液加入BSA溶液室温静置30min，离心去上清，保存液重悬得重悬溶液；当待偶联的抗体为兔IgG时，得到重悬溶液A；当待偶联的抗体为新型冠状病毒N抗体时，得到重悬溶液B；重悬溶液A和重悬溶液B等体积混合得混合溶液；

S7.往混合溶液中加入铺金液，再将其加入到玻纤上铺匀，烘干；所述铺金液的配方为30mM tris、0.5％PEG、5％蔗糖、0.3％casein-Na、0.25％T20、5/万proclin 300。

3.如权利要求2所述金标记垫的制备方法，其特征在于，所述R2为PEG20000或PVP；混合液为5-15mM的2-巯基甲基戊二酸、0.1％的R2、0.02-0.1mM TCEP；混合液与纳米金的体积比为20:1000；孵育为37℃孵育30-150Min。

4.如权利要求2所述金标记垫的制备方法，其特征在于，所述S2步骤中，离心为10000rpm10min，重悬用含1％BSA的10mM pH＝7.1-7.4PBS，静置为室温静置5-30Min。

5.如权利要求2所述金标记垫的制备方法，其特征在于，所述S3步骤中，所述离心为10000rpm 10min，重悬的悬浮液为50mM MES pH＝6.0、0.1％PVP、5/万proclin 300。

6.如权利要求2所述金标记垫的制备方法，其特征在于，所述S4步骤中，所述MES溶液为50mM MES pH＝6.0；纳米金悬浮液和MES溶液的体积比为1:4。

7.如权利要求2所述金标记垫的制备方法，其特征在于，所述S5步骤中，所述MES溶液为50mM MES pH＝6.0；所述活化为37℃活化30min或者2-8℃活化6h；HEPE溶液为50mM pH＝7.5的HEPE。

8.如权利要求2所述金标记垫的制备方法，其特征在于，所述S6步骤中，所述BSA溶液为10％BSA；保存液的配方为30mM tris、0.1％PVP、4％蔗糖、0.1％BSA、0.3％casein-Na、5/万proclin 300。

9.如权利要求2所述金标记垫的制备方法，其特征在于，所述S7步骤中，溶液A与铺金液的体积比为1:4；溶液A与铺金液的总体积与玻纤的用量比为1ml：17cm²的；所述烘干为37-45℃烘干箱中烘干4h以上。

10.一种病毒抗原检测试纸的制备方法，其特征在于，使用权利要求1-9任一所述方法制备其中的金标记垫；

优选的，包括如下步骤，

先制备金标记垫，然后包被，组装即可；

其中包被为将T线抗体、C线抗体划到NC膜上后烘干；

优选的，所述包被为将T线抗体、C线抗体分别用包被液稀释至0.8mg/mL,使用划膜仪，按照1.0μL/cm的参数要求，划到NC膜上，放入37-45℃烘干箱中烘干4h以上，密封保存待用；更优选的，所述包被液为30mM TRIS-HCl、2％蔗糖、5/万proclin300；

所述组装为按照吸水纸，NC膜，金标记垫，样本垫的顺序依次组装好，然后切成所需试纸大小即可。