[发明专利]一种病毒抗原检测试纸的金标记垫及其检测试纸的制备方法

说明书

本发明公开了一种病毒抗原检测试纸的金标记垫的制备方法。选用了2‑巯基甲基戊二酸作为修饰纳米金的材料。将纳米金修饰后通过化学偶联的方式，将待标记的蛋白间接的连接在纳米金上，该方式下，原料的使用量较少，产品特异性高、灵敏度相对较高，产品成本相对较低。

技术领域

本发明涉及检测试剂领域，尤其涉及一种病毒抗原检测试纸的金标记垫及其检测试纸的制备方法。

背景技术

传统新型冠状病毒抗原检测试纸多使用3种探针进行检测，①胶体金，制备成本低廉，偶联方式简单，物理吸附连接，原料使用量相对较大，原料利用率相对较低；②乳胶微球，微球制备工艺成熟，微球颗粒较大，颗粒之间容易吸附，粒径及浓度批间差异较难准确控制，化学键结合，相对较为稳定，信号值较强；③荧光微球，多在定量产品使用，其特点同乳胶微球类似，多需要配检测读数仪器。

发明内容

本发明的目的在于提供一种将纳米金修饰后通过化学偶联的方式，将待标记的蛋白间接的连接在纳米金上，该方式下，原料的使用量较少，产品特异性高、灵敏度相对较高，产品成本相对较低。

为实现上述目的，本发明提供一种病毒抗原检测试纸的金标记垫的制备方法，其特征在于，选用了2-巯基甲基戊二酸作为修饰纳米金的材料。

进一步，包括如下步骤，

S1.将5-15mM的2-巯基甲基戊二酸、0.05-2％的R2、0.02-0.1mM TCEP的混合液，与纳米金混合孵育；

优选的，所述R2为PEG20000或PVP；混合液为5-15mM的2-巯基甲基戊二酸、0.1％的R2、0.02-0.1mM TCEP；混合液与纳米金的体积比为20:1000；孵育为37℃孵育30-150Min；

S2.离心去上清，重悬后超声静置；

优选的，所述离心为10000rpm 10min，重悬用含1％BSA的10mM pH＝7.1-7.4PBS，静置为室温静置5-30Min；

S3.离心去上清，重悬后超声悬浮得到纳米金悬浮液；

优选的，所述离心为10000rpm 10min，重悬的悬浮液为50mM MES pH＝6.0、0.1％PVP、5/万proclin 300；

S4.将上述所得纳米金悬浮液加入MES溶液后超声清洗，离心去上清；

优选的，所述MES溶液为50mM MES pH＝6.0；纳米金悬浮液和MES溶液的体积比为1:4；

S5.加入MES溶液重悬上述所得沉淀，再加入偶联活化剂活化，再离心去上清，用500μL 50mM HEPE(pH＝7.5)超声悬浮后，加入待偶联的抗体2-8℃过夜；所述待偶联的抗体为兔IgG或新型冠状病毒N抗体；

优选的，所述MES溶液为50mM MES pH＝6.0；所述活化为37℃活化30min或者2-8℃活化6h；HEPE溶液为50mM pH＝7.5的HEPE；

S6.将S5所得溶液加入BSA溶液室温静置30min，离心去上清，保存液重悬得重悬溶液；当待偶联的抗体为兔IgG时，得到重悬溶液A；当待偶联的抗体为新型冠状病毒N抗体时，得到重悬溶液B；重悬溶液A和重悬溶液B等体积混合得混合溶液；

优选的，BSA溶液为10％BSA；保存液的配方为30mM tris、0.1％PVP、4％蔗糖、0.1％BSA、0.3％casein-Na、5/万proclin 300；

S7.往混合溶液中加入铺金液，再将其加入到玻纤上铺匀，烘干；所述铺金液的配方为30mM tris、0.5％PEG、5％蔗糖、0.3％casein-Na、0.25％T20、5/万proclin 300；