[发明专利]一种诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法

权利要求书

1.一种诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：蓖麻无菌苗的培养，将经过消毒处理的蓖麻种子播种在1/2MS培养基，待其萌发；

具体为将蓖麻种子用温水浸泡1h，其间换一次水，浸泡后，采用95%乙醇浸泡2min后转入超净台，用无菌水洗5次之后，在平皿中剥去种皮，放入无菌水中浸泡待处理，剥好的种子用20% NaClO溶液浸泡15min，再用无菌水洗5-6次后，播种于玻璃培养瓶内的1/2 MS培养基上，16L/8D，光照30μmol·m^-2·s^-1，21℃培养箱中培养至萌发；

步骤2：丛芽的诱导培养，子叶刚长出后，无菌取出，切取其子叶节转接入预培养基暗培养6天后，取出转接入诱导丛芽培养基，放于光照培养箱继续进行培养，培养至在原子叶节的切口周围有芽点冒出；

具体为将萌发到2片子叶刚展开时的蓖麻幼苗，在超净台中从培养瓶取出，置于平皿上，用解剖刀切取子叶节转接入预培养基，白天21ºC，晚上19ºC条件下暗培养6天后，取出转接入诱导丛芽培养基，放于光照培养箱继续进行培养，光照强度为30µmol/m²·s，白天温度为24ºC，晚上温度为21ºC条件下，再继续培养15天，在原子叶节的切口周围有芽点冒出；

还包括再生苗的生根培养，诱导获得的蓖麻幼苗生长到至少有2片真叶，切取下来转入生根培养基，放入光照培养箱进行生根培养；

所述预培养基为加入0.8mg/L 6-BA的MS培养基；所述诱导丛芽培养基为加入0.8mg/L6-BA、0.02mg/LIBA、5g/L蓖麻胚乳研磨液、30µmol/L SNP、1mg/L AgNO₃和200mg/L Vc的MS培养基；所述生根培养基为含有0.3 mg /L IBA的1/2 MS培养基；

所述MS培养基的配方为：琼脂浓度为7.5g/L，蔗糖浓度为30g/L，无糖无琼脂MS粉4.41g/L。

2. 根据权利要求1所述的诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法，其特征在于：在丛芽的诱导培养后，进行扩繁芽：将丛生芽在超净台中取出，将茎基部切出，转入含有0.02mg/LIBA、1mg/LAgNO₃、200mg/LVc、30µmol/LSNP、5g/L蓖麻胚乳研磨液、1.0mg/L 6-BA的MS培养基中，同诱导培养温度光照条件下继代培养20天。