[发明专利]一种诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法

说明书

本发明公开了一种诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法，属于植物组织培养快繁技术领域，是将蓖麻无菌苗的子叶节培养在加有0.2‑1.0mg/L 6‑BA的MS培养基进行暗培养后，转入光下继续培养，发现随着6‑BA浓度的提高，可以促进蓖麻子叶节丛芽的发生。将再生苗带有腋芽的茎段再次转入6‑BA的上述培养基之后，可以促进茎段芽的高频发生。将诱导出的幼苗转接入含有0.3mg/L IBA的1/2MS培养基，可以诱导出根，完成植株的再生。本发明无需特殊的培养设备，处理步骤简单，较短时间就可以获得大量无菌苗，为蓖麻遗传转化体系的建立提供了前提技术。

技术领域

本发明属于植物组织培养快繁技术领域，具体涉及一种诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法,能促进蓖麻子叶节在短时间内获得大量无菌苗，主要用于优质无菌蓖麻种苗的培育，和蓖麻遗传转化体系的建立，可以推广于蓖麻种植的应用领域，和提高蓖麻产量和蓖麻种子油脂含量，以及抗病性等领域的研究开发。

背景技术

蓖麻(Ricinuscommunis)是大戟科(Euphorbiaceae)的一种双子叶植物。它起源于地中海盆地东南、东非和印度，但也广泛的分布于热带地区，现在也作为观赏植物和经济作物在世界各地有广泛种植。蓖麻种子富含油脂，含油量约为40％至60％，而且蓖麻油的流动性很强，凝固点较低，在-22℃下仍可流动，被大量用作航空航天的高级润滑剂和动力皮带的保护油，还可以用于制备生物柴油，媒染剂、药物等，用途非常广泛。同时蓖麻种子中还具有抗肿瘤活性的蓖麻毒蛋白。蓖麻综合利用价值极高，对蓖麻的需求量也日益增大，对蓖麻进行生物工程遗传改良也逐渐被重视起来。

目前蓖麻种植业还存在诸多问题，品种比较混杂、种子的繁殖体系还不够健全，使蓖麻的种植效益较低。同时蓖麻的产量，含油量和抗病性也需要提高，而组织培养和遗传转化技术，是创制优质种质资源的重要途径。蓖麻稳定高效组培体系的建立是改良种质，快速扩繁种苗和遗传转化体系建立的重要前提。

蓖麻组织培养体系的建立自上世纪80年代便开始摸索，已经取得了一定的进展。如丁兰等以蓖麻种子培养的无菌苗作为外植体，研究了上胚轴、下胚轴、子叶和根的脱分化能力和再分化能力，以及不同种类和浓度激素对芽增殖和生根的影响。王等以离体培养蓖麻的营养芽，得到了再生植株，发现在培养基中添加适量VC可以减轻褐化现象，并发现同时使用IAA和IBA，可以促进生根。Sujatha用芽尖和胚轴为外植体建立了较高效的蓖麻离体再生体系，并尝试先使用TDZ培养基，一段时间后将外植体转到6-BA培养基上，获得了较高的芽增殖率，但是由于蓖麻自身再生能力与增殖能力极低，在培养中易出现褐化、转化率低以及成活率低等问题，蓖麻组培体系和遗传转化体系一直难以成功应用。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种快速高效获得大量优质无菌苗的诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种诱导蓖麻子叶节丛芽高频发生组培体系的建立方法，包括以下步骤：

步骤1：蓖麻无菌苗的培养，将经过消毒处理的蓖麻种子播种在1/2MS培养基，待其萌发；

步骤2：丛芽的诱导培养，子叶刚长出后，无菌取出，切取其子叶节转接入预培养基暗培养6天后，取出转接入诱导丛芽培养基，放于光照培养箱继续进行培养，培养至在原子叶节的切口周围有芽点冒出；

还包括再生苗的生根培养，诱导获得的蓖麻幼苗生长到至少有2片真叶，切取下来转入生根培养基，放入光照培养箱进行生根培养；

所述预培养基、诱导丛芽培养基和生根培养基的基础培养基均为MS培养基。

所述MS培养基的配方为：琼脂浓度为7.5mg/L，蔗糖浓度为30g/L，无糖无琼脂MS粉4.41g/L。