[发明专利]牛支原体SBP-2单克隆抗体制备及其应用

权利要求书

1.一种牛支原体SBP-2胶体金检测试纸，其特征在于，包括样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫和PVC胶板，其中，样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫依次搭接，固定在PVC胶板上，所述金标垫表面均匀设置金标抗体，所述金标抗体中包括SBP-2蛋白单克隆抗体，所述NC膜靠近样品垫的一端设置一条T线，远离样品垫的另一端设置一条C线。

2.根据权利要求1所述的胶体金检测试纸，其特征在于，所述金标抗体的结合pH为8.0。

3.根据权利要求1所述的胶体金检测试纸，其特征在于，所述金标抗体中SBP-2蛋白单克隆抗体的标记浓度为40μg/mL。

4.根据权利要求1所述的胶体金检测试纸，其特征在于，所述T线是T液在NC膜上画的一条线，所述T液包括PB缓冲液和纯化的SBP-2蛋白单克隆抗体。

5.根据权利要求1所述的胶体金检测试纸，其特征在于，所述C线是C液在NC膜上画的一条线，所述C液包括PB缓冲液和纯化蛋白A。

6.根据权利要求1所述的胶体金检测试纸，其特征在于，所述NC膜的孔径为0.1μm。

7.一种单克隆抗体的制备方法，制备权利要求1所述的SBP-2蛋白单克隆抗体，其特征在于，包括：

以原核表达的纯化后SBP-2蛋白为免疫原，对4～5周龄的雌性小鼠进行多次免疫，得到阳性小鼠，所述SBP-2蛋白来源于一种大肠杆菌，所述大肠杆菌保藏号为CGMCC NO:23133；

取阳性小鼠的脾细胞，将所述脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞；

所述的杂交瘤细胞进行二次筛选和第二次克隆后，得到稳定分泌异性抗体的杂交瘤细胞，所述二次筛选分别是ELISA检测方法初筛和Western blot复检；

腹腔注射所述稳定分泌异性抗体的杂交瘤细胞，采集腹水，得到所述SBP-2蛋白单克隆抗体，所述SBP-2蛋白单克隆抗体是IgG1亚类。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述对雌性小鼠进行多次免疫，得到阳性小鼠的步骤中，还包括：

取200μg抗原与等体积的弗氏完全佐剂充分乳化后，在小鼠的颈部、腹部、脚掌等皮下部位进行多点注射进行首次免疫，得到首次免疫小鼠；

在首次免疫后2周，取100μg抗原与等体积的弗氏不完全佐剂完全乳化后，在所述首次免疫小鼠的颈部、腹部、脚掌等皮下部位进行多点注射进行二次免疫，得到二次免疫小鼠；

在二次免疫后2周，取100μg抗原与等体积的弗氏不完全佐剂完全乳化后，在所述二次免疫小鼠的颈部、腹部、脚掌等皮下部位进行多点注射进行三次免疫，得到三次免疫小鼠；

在三次免疫后1周，剪所述三次免疫小鼠的尾尖采血50μL左右，37℃恒温培养箱中静置1h后，4℃过夜，3000r/min离心30min分离血清，取适量血清用ELISA方法检测小鼠抗体效价，得到抗体效价高的小鼠；

取不加任何佐剂的400μg抗原腹腔注射所述抗体效价高的小鼠，得到阳性小鼠。