[发明专利]牛支原体SBP-2单克隆抗体制备及其应用

说明书

本申请保护了一种牛支原体SBP‑2胶体金检测试纸，包括样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫和PVC胶板。解决了常用牛支原体检测方法使用场景受限的问题，具有快速、高效、便捷等优点，适合临床检测牛支原体使用。本申请还保护了牛支原体SBP‑2胶体金检测试纸中的牛支原体SBP‑2蛋白单克隆抗体的制备方法，利用大肠杆菌中产生的牛支原体SBP‑2蛋白抗原，将阳性小鼠的脾细胞和小鼠脊髓瘤细胞进行细胞融合，制备牛支原体SBP‑2蛋白单克隆抗体。

技术领域

本申请涉及病原体检测领域，尤其涉及一种牛支原体SBP-2单克隆抗体制备及其应用。

背景技术

牛支原体是世界范围内引起牛呼吸道疾病、中耳炎、关节炎、乳腺炎等多种疾病的病原体，它对奶牛和肉牛的健康、福利和生产力具有重要影响。

对于牛支原体的常用检测方法，比如PCR、荧光定量PCR、RPA、建立间接ELISA 等检测方法，大多需要依赖实验室的条件才能进行，对仪器设备要求较高，专业性较强，其局限性导致使用场景受限且效率不高。

为了解决常用牛支原体检测方法使用场景受限的问题，需要一种新的检测方法，具有快速、高效、便捷等优点，适合临床检测牛支原体使用。

发明内容

本申请提供了一种牛支原体SBP-2胶体金检测试纸，具有快速、高效、便捷等优点，适合临床检测牛支原体使用，解决了常用牛支原体检测方法使用场景受限的问题。

本申请保护的一种牛支原体SBP-2胶体金检测试纸，包括样品垫、金标垫、NC 膜、吸水垫和PVC胶板，其中，样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫依次搭接，固定在 PVC胶板上，所述金标垫表面均匀设置金标抗体，所述金标抗体中包括SBP-2蛋白单克隆抗体，所述NC膜靠近样品垫的一端设置一条T线，远离样品垫的另一端设置一条C 线。

可选的，所述金标抗体的结合pH为8.0。

可选的，所述金标抗体中SBP-2蛋白单克隆抗体的标记浓度为40μg/mL，在抗体含量为40μg/mL时，波长525nm处出现最高波峰，标记的抗体含量较少时，发现胶体金出现不同程度的聚集情况。

可选的，所述T线是T液在NC膜上画的一条线，所述T液包括PB缓冲液和纯化 SBP-2蛋白单克隆抗体，如果存在病原体，肉眼可以观察到T线出现红色条带。

可选的，所述C线是C液在NC膜上画的一条线，所述C液包括PB缓冲液和纯化蛋白A，蛋白A能够与各种抗原都结合，设置C线作为质检线。

可选的，所述NC膜的孔径为0.1μm，膜的孔径对蛋白的吸附不同，孔径越小所吸附的蛋白越多。

本申请保护了一种单克隆抗体的制备方法，制备上述牛支原体SBP-2胶体金检测试纸中的SBP-2蛋白单克隆抗体，包括：

以原核表达纯化后的SBP-2蛋白为免疫原，对雌性小鼠进行多次免疫，得到阳性小鼠，所述SBP-2蛋白来源于一种大肠杆菌，所述大肠杆菌保藏号为CGMCC NO:23133；

取阳性小鼠的脾细胞，将所述脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞；

所述的杂交瘤细胞进行二次筛选和第二次克隆后，得到稳定分泌异性抗体的杂交瘤细胞，所述二次筛选分别是ELISA检测方法初筛和Western blot复检；

腹腔注射所述稳定分泌异性抗体的杂交瘤细胞，采集腹水，得到所述SBP-2蛋白单克隆抗体。

可选的，所述SBP-2蛋白单克隆抗体是IgG1亚类。

可选的，所述对雌性小鼠进行多次免疫，得到阳性小鼠的步骤中，还包括：

取200μg抗原与等体积的弗氏完全佐剂充分乳化后，在小鼠的颈部、腹部、脚掌等皮下部位进行多点注射进行首次免疫，得到首次免疫小鼠；