[发明专利]呼吸道核酸复合质控品的制备方法

说明书

本发明涉及核酸检测质量控制领域，特别涉及呼吸道核酸复合质控品的制备方法。本发明的制备方法是将呼吸道灭活病原体材料高值加入组分为3‑吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS)、二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇双(2‑氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)、脂肪醇聚氧乙烯醚、牛血清白蛋白(BSA)、异硫氰酸胍、鲸蜡醇聚氧乙烯(3)醚、PEG3000和Rnase抑制剂的样品保存液中，分装后放置‑20℃，获得稳定的质控品。本发明质控品均匀性、稳定性良好，不受运输、温度等因素影响，性能稳定。

技术领域

本发明涉及核酸检测质量控制领域，特别涉及呼吸道核酸复合质控品的制备方法。

背景技术

流感是由流感病毒引起的一种急性病毒性呼吸道感染，传染性强，发病率高，其中甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒更强，症状更严重。在成年人和儿童中，发热伴呼吸道症候群是最普遍的急性传染病，对于患者和公共卫生部门来说，准确快速诊断由哪种病毒引起的呼吸道感染十分重要。新型冠状病毒导致的肺炎与常见的呼吸道病毒以及细菌性病原引起肺炎等有相似之处，单从临床表现、胸部影像学难以鉴别，需依靠病原学检测来区分。因此对于引起的发热等呼吸道症状疾病的病原都需要进行鉴别。临床上常见的呼吸道病原体包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、合胞病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体、副流感I型、副流感II型、副流感III型、腺病毒、鼻病毒、偏肺病毒、人博卡病毒、百日咳杆菌、肠道病毒、嗜肺军团菌、冠状病毒等，快速准确对病原体进行鉴定对于临床诊疗以及防止药物滥用具有重要意义。

目前，检测呼吸道病原体的核酸检测方法主要包扩基因芯片法、核酸等温扩增法和实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。基于上述方法已研发出了多种呼吸道病原体基因检测试剂盒，但是目前市面上并没有经济、有效、稳定和多种呼吸道病原体基因检测试剂盒的质控品销售，且现有的核酸质控品类产品多具有不稳定、易降解和不易保存等缺点，而质控品又是衡量和评估一款试剂盒检测准确性和稳定性等性能的重要方法和质量指标。因此，急需提供一种可稳定保存的复合的呼吸道核酸质控品。

临床实验室使用的呼吸道核酸质控品有几大缺陷：①包含项目少：多为针对某项指标的单独质控品，而无复合质控品；②与试剂配套使用：大部分是与其试剂盒配套使用的质控品，不适用所有试剂厂家；③稳定性不好。④材料用质粒，不能监控提取和扩增全过程。因此能够发明一种呼吸道核酸复合质控品，具有很好的临床实用性，也非常有利于临床的推广和发展。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了呼吸道核酸复合质控品的制备方法，所述质控品均匀性、稳定性良好，不受运输、温度等因素影响，性能稳定。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了样品保存液，包括缓冲液、表面活性剂、酶抑制剂和/或保护剂；

所述缓冲液包括MOPS缓冲液；和/或

所述表面活性剂包括脂肪醇聚氧乙烯醚、鲸蜡醇聚氧乙烯(3)醚或PEG3000中的一种或两者以上的组合；和/或

所述酶抑制剂包括Rnasin和/或异硫氰酸胍；和/或

所述保护剂包括蔗糖。

在本发明的一些具体实施方案中，上述缓冲液为咽拭子保存液所替代。

在本发明的一些具体实施方案中，上述缓冲液还包括磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、Hanks缓冲液、Tricine缓冲液或Bicine缓冲液中的一种或两者以上的组合；

所述表面活性剂还包括Span-80、Span-20、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸锂、十二烷基硫酸钠、Tween 20、Triton X-100、NP40、SDS、十二烷基肌氨酸钠、PEG6000或PEG8000中的一种或两者以上的组合；

所述酶抑制剂还包括焦碳酸二乙酯、氧钒核糖核苷复合物、尿素或硅藻土中的一种或两者以上的组合；