[发明专利]一种基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法

权利要求书

1.一种基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：包括：取15～100μL血清，加入5～50μL氘代同位素内标溶液混匀，再加入45～300μL甲醇，充分涡旋，离心，取上清液进行气相色谱-串联质谱检测；根据定性离子对和保留时间对尼古丁、可替宁进行定性；将尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积与氘代同位素内标定量子离子的峰面积的比值分别代入尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线，获得尼古丁和可替宁的浓度；

其中，气相色谱检测条件：色谱柱为DB-EUPAH毛细管柱，规格为：柱长15～30m，内径0.18～0.25mm，膜厚0.14～0.25μm；进样量为1～2μL，进样方式为不分流进样，进样口温度为200～280℃；色谱柱初始温度为35～100℃，保持1min，以20℃/min升至280℃，保持2min；

尼古丁、可替宁和氘代苊的定量离子对分别为162-84m/z、176-98m/z和162-160m/z；

离子对162-84m/z和176-98m/z的碰撞能量为10eV；离子对162-160m/z的碰撞能量为15eV。

2.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：取25μL血清，加入5μL氘代同位素内标溶液混匀，再加入70μL甲醇，充分涡旋，离心，取上清液进行气相色谱-串联质谱检测。

3.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的氘代同位素内标为氘代苊；所述的氘代同位素内标溶液为氘代苊浓度为1μg/mL的甲醇溶液。

4.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的离心的条件为：在温度4～40℃下、以转速5000～12000rpm/min离心5～15min。

5.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的气相色谱检测条件：色谱柱为DB-EUPAH毛细管柱，规格为：柱长20m，内径0.18mm，膜厚0.14μm；进样量为2μL，进样方式为不分流进样，进样口温度为220℃；色谱柱初始温度为60℃，保持1min，以20℃/min升至280℃，保持2min。

6.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：串联质谱检测条件：电子轰击电离源，70eV；离子源和传输线的温度均为300℃；检测模式为MS/MS检测模式。

7.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：尼古丁的定性离子对为162-84m/z和162-133m/z；可替宁的定性离子对为176-98m/z和176-68m/z；氘代苊的定性离子对为162-160m/z和162-158m/z。

8.根据权利要求7所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：离子对176-68m/z和162-158m/z的碰撞能量为20eV；离子对162-133m/z碰撞能量为35eV。

9.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的尼古丁的保留时间为5.7～6.2min，可替宁的保留时间为9.0～9.5min。

10.根据权利要求1所述的基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线是由以下方法绘制的：取25μL混合人血清，与尼古丁标准溶液、可替宁标准溶液以及5μL氘代苊溶液混合，甲醇定容至100μL，得到标准曲线溶液，涡旋，离心，取上清液进行气相色谱-串联质谱检测；以尼古丁或可替宁的浓度为横坐标，以尼古丁或可替宁的定量子离子的校正峰面积与氘代苊的定量子离子的峰面积的比值为纵坐标，建立尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线；其中，所述的尼古丁或可替宁的定量子离子的校正峰面积为尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积减去基质本底中尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积。