[发明专利]HRP标签纳米抗体融合蛋白及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种融合蛋白或与所述融合蛋白相关的生物材料，所述融合蛋白依次包括Trx标签、辣根过氧化物酶HRP和纳米抗体；

所述Trx标签的氨基酸序列如序列1第1-111位所示；

所述辣根过氧化物酶HRP的氨基酸序列如序列1第127-435位所示。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白或生物材料，其特征在于：所述融合蛋白依次包括Trx标签、连接肽、辣根过氧化物酶HRP、连接肽、纳米抗体；

或，所述连接肽的氨基酸序列如序列1第112-126位所示；

或，所述纳米抗体为B型肉毒毒素纳米抗体；

或，所述B型肉毒毒素纳米抗体的氨基酸序列如序列1第453-569位所示；

或，所述融合蛋白为如下R1)-R3)所示的蛋白质：

R1)氨基酸序列是序列1所示的蛋白质；

R2)将R1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

R3)与R1)或R2)所示的氨基酸序列具有90％或90％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；

或，与所述融合蛋白相关的生物材料为编码所述融合蛋白的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物。

3.权利要求1或2所述融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：使权利要求1或2所述融合蛋白的编码基因在生物或生物细胞中进行表达，得到权利要求1或2所述融合蛋白。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述使权利要求1或2所述融合蛋白的编码基因在生物或生物细胞中进行表达的方法包括如下步骤：

A1)将融合蛋白表达载体转化大肠杆菌，得到重组菌；所述融合蛋白表达载体为将所述融合蛋白的编码基因插入表达载体后得到的载体；

A2)在所述重组菌的培养体系中添加0.8mM的IPTG进行诱导培养，得到诱导后菌体；

A3)将所述诱导后菌体进行活化，得到活化后菌体；

A4)从所述活化后菌体中纯化得到所述融合蛋白。

5.成套融合蛋白或与所述成套融合蛋白相关的生物材料，所述成套融合蛋白包括融合蛋白甲和融合蛋白乙；

所述融合蛋白甲为权利要求1或2所述的融合蛋白；

所述融合蛋白乙依次包括Trx标签、纳米抗体A和纳米抗体B；

所述纳米抗体A、所述纳米抗体B和所述融合蛋白甲中的纳米抗体为相同抗原的纳米抗体，且抗原表位互不相同。

6.根据权利要求5所述的成套融合蛋白或生物材料，其特征在于：所述融合蛋白乙依次包括Trx标签、连接肽、纳米抗体A、连接肽和纳米抗体B；

或，所述连接肽的氨基酸序列如序列3第248-259位所示；

或，所述纳米抗体A和纳米抗体B为B型肉毒毒素纳米抗体；

或，所述纳米抗体A的氨基酸序列如序列3第129-247位所示；

或，所述纳米抗体B的氨基酸序列如序列3第260-386位所示；

或，所述融合蛋白乙为如下S1)-S3)所示的蛋白质：

S1)氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；

S2)将S1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

S3)与S1)或S2)所示的氨基酸序列具有90％或90％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；

或，与所述成套融合蛋白相关的生物材料包括与所述融合蛋白甲相关的生物材料和与所述融合蛋白乙相关的生物材料；

与所述融合蛋白甲相关的生物材料为编码所述融合蛋白甲的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物；

与所述融合蛋白乙相关的生物材料为编码所述融合蛋白乙的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物。