[发明专利]一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种订书肽，其特征在于，所述订书肽以Ac-DPHRLLQQLVLSGNLIKEAVRRLHSR-NH₂为肽链模板，其中3_H、7_Q、19_A和23_L被S₅替换并分别环合两次。

2.一种如权利要求1所述的订书肽的应用，其特征在于，该订书肽用于制备治疗骨质疏松症的药物中。

3.一种如权利要求1所述的订书肽的应用，其特征在于，该订书肽用于制备抑制破骨细胞分化的试剂中。

4.一种制备如权利要求1所述的订书肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在缩合剂的作用下分别使C端首个氨基酸与固相载体偶联；

(2)使用脱保护试剂脱去氨基酸上的Fmoc保护基；

(3)在缩合剂作用下连接下一个氨基酸；

(4)重复进行脱保护-耦合操作，依照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以S₅分别替代i和i+4位氨基酸；

(5)在环合剂作用下使i和i+4位S₅氨基酸发生烯烃复分解反应，环合肽链；

(6)重复进行脱保护-耦合操作，依照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以S₅分别替代i和i+4位氨基酸；

(7)最后一个氨基酸脱保护后乙酰化；

(8)在环合剂作用下使i和i+4位S₅氨基酸发生烯烃复分解反应，二次环合肽链；

(9)使用切割试剂将肽链从载体上切下，纯化后得相应订书肽。

5.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(9)采用的纯化方法为反向高效液相色谱法，条件如下：色谱柱：YMC-Pack ODS-AQ柱；流动相：流动相A为0.1％TFA/水，流动相B为0.1％TFA/乙腈；梯度洗脱程序：40％B洗脱0～5min，40％B～60％B、5～60min；流速为15ml/min，进样量为5ml，检测波长214nm。

6.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中采用的缩合剂为DIC-Oxyme缩合体系，活化剂为DIC，以NMP为溶剂。

7.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述脱保护试剂为Oxyme、哌啶及DMF的混合溶液，比例为71:2:4(m/v/v)。

8.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，乙酰化试剂为吡啶与醋酸酐的混合液，投料比为1:1(v/v)。

9.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(5)、步骤(8)中所述环合剂为GrubbsⅠ试剂的二氯乙烷的溶液，投料比为树脂载样量:GrubbsⅠ试剂:二氯乙烷＝0.3:58:6(mmol/mg/ml)。

10.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(9)中，所述切割试剂为TIPS、H₂O和TFA的混合溶液，体积比为2.5:2.5:95，所述切割试剂与直链肽的体积质量比为1:10mL/mg。