[发明专利]一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用

说明书

发明涉及一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用。本发明以氨基树脂为载体，按照模板FRATtide：Ac‑DPHRLLQQLVLSGNLIKEAVRRLHSR‑NH₂氨基酸序列在DIC‑Oxime缩合体系中，通过Fmoc固相合成法，合成得到肽链，其间在保留关键氨基酸残基的基础上，于特定位置以S₅代替原有氨基酸，连接在树脂上直链肽在GrubbsⅠ试剂的二氯乙烷溶液中进行烯烃复分解反应环合后从树脂上切下得到目标双订书肽。本发明的方法简单易行，纯度大，产率高。进一步的实验证实，本发明的双订书肽可显著抑制破骨细胞分化，在骨质疏松症等相关疾病治疗中具有潜在的应用价值。

技术领域

本发明涉及多肽药物领域，具体涉及一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用。

背景技术

骨质疏松症是以骨量降低、骨组织显微结构发生改变，以骨脆性增加、骨强度下降、易骨折为特征的一种骨病，其病理生理学基础是骨吸收与骨形成的失衡，该平衡由促骨形成的成骨细胞和促骨吸收的破骨细胞进行调控。目前临床使用最广泛的抗骨质疏松药物主要包括抑制破骨细胞分化的双膦酸盐和促进骨形成的特立帕肽等小分子药物。为提高治疗药物的选择性，减少副作用，当前，通过外源性分子来调控成骨细胞和破骨细胞分化相关的重要信号通路已成为骨质疏松研究的热点方向之一。

本申请发明人在现有技术披露的众多信息中注意到，有研究表明糖原合成酶激酶3β(GSK3β)能够促进破骨细胞关键因子NFATc1从细胞核向细胞质的转移，从而抑制破骨细胞的分化；还有文献报道FRATtide与磷酸化的GSK3β能形成稳定的复合物晶体结构；而GSK3β与磷酸化GSK3β之间存在相互转化的关系，因此，本申请发明人推测特异性地靶向磷酸化GSK3β进而抑制磷酸化GSK3β可在一定程度上抑制GSK3β的表达，从而达到对破骨细胞的负向调控。

生物体内蛋白质之间的相互作用在生命过程中起着至关重要的作用。通过人工合成分子来调控蛋白-蛋白相互作用界面是一种有效的策略，其已经广泛地应用于药物化学中以进行疾病干预，其中人工合成多肽即为调控蛋白间相互作用的一种重要手段。但因存在稳定性低，透膜性差等问题，当前，多肽类药物在临床上的应用受到了较大的限制。应用全碳骨架形成侧链环合结构改造多肽来稳定α-螺旋肽的活性构象，即订书肽(stapledpeptide)，成为克服这一缺陷的最直接最有效方法。

目前现有技术公开了一些具有抑制破骨细胞分化的活性的多肽。例如专利文献CN109111506A，公开了一种用于治疗骨质疏松的多肽，其氨基酸序列为：Asp-Ser-Ser)6-(D-Tyr)-Asn-(D-Trp)-Asn-Ser-Phe-(azaGly)-Leu-Arg(Me)-Phe-NH2((AspSerSer)6-Kp-10，并证明了(AspSerSer)6-Kp-10具有较好的骨靶向作用，可以有效地抑制破骨细胞分化，治疗由于卵巢切除导致的骨质疏松。又如专利文献CN109251242A，公开了一种多肽，该多肽不仅与天然的白细胞介素-3功能相同或类似，并且皮肤渗透度非常优秀，可以通过抑制核因子κB受体活化因子配体-核因子κB受体活化因子信号路径，抑制核因子κB的活化及核转录，并抑制由核因子κB受体活化因子配体及炎性细胞因子诱导的抗酒石酸盐酸性磷酸酶、组织蛋白酶K或1型或2型肿瘤坏死因子受体的表达，从而以浓度依赖性的方式抑制破骨细胞的分化。但目前未见FRATtide或其订书肽对破骨细胞分化的作用的研究。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的问题，提供一种抑制破骨细胞分化的订书肽、提供所述订书肽的用途和提供所述订书肽的制备方法。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是：

一种订书肽，所述订书肽以Ac-DPHRLLQQLVLSGNLIKEAVRRLHSR-NH₂为肽链模板，其中3_H、7_Q、19_A和23_L被S₅替换并分别环合两次。