[发明专利]一种血清中25羟基维生素D的检测方法

权利要求书

1.一种血清中25羟基维生素D的检测方法，其特征在于，采用液相色谱串联质谱进行检测，所述液相色谱的条件包括：色谱柱为UPLC ACQUITY^TM HSS PFP column；流动相A为0.1％-0.5％甲酸水溶液，流动相B为甲醇。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的尺寸为2.1mm×50mm，1.8μm。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱采用梯度洗脱的方式。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：

0-4min，流动相B的体积分数由70％变化至95％；

4-4.01min，流动相B的体积分数由95％变化至70％；

4.01-4.5min，流动相B的体积分数为70％。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的条件还包括：流速为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量为2-10μL。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的条件包括：ESI源正离子模式，多反应监测扫描模式；喷雾电压：1.5-2.5kV；去溶剂温度：450-550℃；雾化器流速800-1000L/h；离子源温度：120-150℃；锥孔气流速：55-65L/hr。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱的检测参数如下所示：

目标分析物	Q1(Da)	Q3(Da)	CV(V)	CE(V)
25-OH VD2	413.3	113.1	20	10
25-OH VD3	383.3	257.2	20	15
25-OH VD2_IS	416.4	113.1	20	10
25-OH VD3_IS	386.3	257.2	20	15

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：

以BSA为基质，配制含不同浓度梯度目标物的校准品溶液，加入同位素标记物进行预处理后，用LC-MS/MS检测；以校准品溶液中目标物的浓度为X轴，以校准品溶液中目标物与其对应同位素标记物的峰面积比为Y轴，绘制得到标准工作曲线；

在待测血清样本中加入同位素标记物，进行预处理后用LC-MS/MS检测，并根据标准工作曲线得出待测血清样本中25羟基维生素D的含量。