[发明专利]一种血清中25羟基维生素D的检测方法

说明书

本发明属于化学检测技术领域，公开了一种血清中25羟基维生素D的检测方法。所述检测方法采用液相色谱串联质谱进行检测，所述液相色谱的条件包括：色谱柱为UPLC ACQUITY^TM HSS PFP column；流动相A为0.1％‑0.5％甲酸水溶液，流动相B为甲醇。该方法特异性强、准确度高，适用于各年龄段人群血清样本中25羟基维生素D的检测。

技术领域

本发明属于化学检测技术领域，尤其涉及一种血清中25羟基维生素D的检测方法。

背景技术

维生素D(以下称VD)是一种脂溶性类固醇衍生物，是人体必需的维生素，主要包括VD2和VD3两种形式。人体内的VD可以通过阳光照射转化或从食物中摄取，例如贮存于皮下的7-脱氢胆固醇经阳光中紫外线照射后可转化为VD3，而VD2可以通过食物进行补充。人体内的VD2和VD3经肝脏会代谢为25-OH VD2和25-OH VD3，血液中25-OH VD2和25-OH VD3浓度高，是体内VD的主要存在形式，且稳定好，体内循环半衰期约为2-3周，因此血液中的25-OHVD2和25-OH VD3成为公认的评价人体VD营养状态的最可靠指标。

然而，在人体中还存在25-OH VD3的差向异构体——3-epi 25-OH VD3，约占总25-OH VD的4％，其在成人体内含量较低，但在新生儿体内浓度极高，约占25-OH VD总浓度的60％。3-epi 25-OH VD3不具有生物活性，在检测时若不能有效分离该物质，将造成25-OHVD3的检测结果偏高的误差。

传统的维生素D检测方法有放射免疫法、竞争蛋白结合法、高效液相色谱法等，其中放射免疫法、竞争蛋白结合法存在前处理复杂、分析时间长、通量低、方法特异性差的缺点，且不能同时准确定量25-OH VD2和25-OH VD3的含量。目前国际普遍认为LC-MS/MS是检测血清中25羟基维生素D的“金标准”，然而当前所用方法仍未能对差向异构体进行有效的分离，检测结果存在偏差。

因此，本发明希望建立一种操作简便、特异性高、灵敏度好的用于检测人血清中25羟基维生素D的方法。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种血清中25羟基维生素D的检测方法，该检测方法特异性强、准确度高，适用于各年龄段人群血清样本中25羟基维生素D的检测。

本发明提供了一种血清中25羟基维生素D的检测方法，采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行检测，所述液相色谱的条件包括：色谱柱为UPLC ACQUITY^TM HSS PFPcolumn；流动相A为0.1％-0.5％甲酸水溶液，流动相B为甲醇。

本发明提出，以上述流动相体系结合特定的色谱柱类型，可以实现25-OH VD2、25-OH VD3和3-epi 25-OH VD3的有效分离，从而提高血清中25羟基维生素D的检测准确性。

优选地，所述色谱柱的尺寸为2.1mm×50mm,1.8μm。

优选地，所述液相色谱采用梯度洗脱的方式。

更优选地，所述梯度洗脱的条件为：

0-4min，流动相B的体积分数由70％变化至95％；

4-4.01min，流动相B的体积分数由95％变化至70％；

4.01-4.5min，流动相B的体积分数为70％。

优选地，所述液相色谱的条件还包括：流速为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量为2-10μL。

优选地，所述质谱的条件包括：ESI源正离子模式，多反应监测扫描模式；喷雾电压：1.5-2.5kV；去溶剂温度：450-550℃；雾化器流速800-1000L/h；离子源温度：120-150℃；锥孔气流速：55-65L/hr。