[发明专利]一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法

权利要求书

1.一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）一步法红/蓝分子印迹量子点荧光探针的制备

A．将红、绿、蓝三种不同荧光发射的CdSe/ZnS QDs粉末分别用超纯水洗涤并抽滤10min后，置于60℃真空干燥12 h，随后将5 mg红色荧光发射CdSe/ZnS QDs粉末和5 mg蓝色荧光发射CdSe/ZnS QDs粉末溶于4 mL三氯甲烷中得到红/蓝分子印迹量子点溶液，将0.4 mg绿色荧光发射CdSe/ZnS QDs溶于2 mL乙醇中得到绿色CdSe/ZnS量子点溶液；

B.将4 mL TritonX-100分散到15 mL环己烷中后，加入200 μL的红/蓝分子印迹量子点溶液，400 r/min搅拌条件下，通过毛细管滴加0.1 mL正硅酸乙酯于反应体系中，然后滴加0.4 mL氨水，400 r/min搅拌2 h后，向反应体系中滴加0.45 mL的由3-氨丙基三乙氧基硅烷、邻苯二甲酸二丁酯和环己烷组成的混合溶液，于25-35℃，400 r/min磁力搅拌下孵育8-12 h，反应结束后，依次用丙酮、30vt%乙醇/水、体积比为8：2的乙醇/乙腈洗脱除去模板分子，得到对邻苯二甲酸二丁酯具有特异荧光抑制响应的红/蓝分子印迹量子点荧光探针，并分散于pH为8.0的盐质量浓度5‰的30%乙醇水溶液中使其终浓度为2.0 mg/L；

（2）样品前处理

取待测海水样品用双层固相萃取小柱对海水中邻苯二甲酸二丁酯进行提取与富集得到前处理样品；

（3）样品的高通量检测

A．将步骤（1）制备的红/蓝分子印迹量子点荧光探针溶液和绿色CdSe/ZnS量子点溶液按适当比例混合得到混合溶液，取200 μL混合溶液加入到酶标板中，并设置空白对照，空白对照组为经0.45 μm玻璃纤维膜过滤的200 μL海水样品；

B．将酶标板置于室温孵育6 min，然后用多功能酶标仪在345nm激发波长下，同步检测450、530、630 nm处的荧光发射强度I₄₅₀、I₅₃₀和I₆₃₀，根据I_RGB =I₅₃₀/[I₄₅₀+I₆₃₀]由标准曲线计算样品中邻苯二甲酸二丁酯的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于：步骤（1）B中由3-氨丙基三乙氧基硅烷、邻苯二甲酸二丁酯和环己烷组成的混合溶液为3-氨丙基三乙氧基硅烷、邻苯二甲酸二丁酯和环己烷的按摩尔比1：4：4的比例混合而成。

3.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于：步骤（2）具体为依次用10 mL甲醇和10 mL超纯水对萃取柱进行活化，然后将1 L待测海水样品加入到已洗净的上样瓶中，打开真空泵，控制上样流速为10 mL/min，富集完毕后，使用10 mL二氯甲烷分两次洗脱小柱，收集洗脱液，氮吹干后复溶于1 mL环己烷中得到前处理样品。

4.根据权利要求2所述的一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于：所述的双层固相萃取小柱的上层为石英砂且其下层为亲水亲脂平衡填料，上层与下层的高度比为1:5。

5.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的红/蓝分子印迹量子点荧光探针溶液与所述的绿色CdSe/ZnS量子点溶液的按体积比8:5的比例混合。