[发明专利]一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法

说明书

本发明公开了一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法，特点是包括以下步骤：（1）采用反相微乳液溶胶‑凝胶方法分别制备对邻苯二甲酸二丁酯具有选择性荧光抑制响应的蓝色/红色分子印迹量子点荧光探针；（2）取待测海水样品用双层固相萃取小柱对海水中邻苯二甲酸二丁酯进行提取与富集得到前处理样品；（3）在酶标孔中加入蓝色/红色分子印迹‑量子点荧光探针及绿色量子点，然后加入前处理样品；室温孵育6 min后，采用多功能酶标仪在345nm激发波长下，读取450、530、630 nm处的荧光发射强度，计算样品中邻苯二甲酸二丁酯的浓度，优点是该方法具有选择性强、灵敏度高、检测时间短、通量高。

技术领域

本发明涉及海洋环境治理技术领域，尤其是涉及一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法。

背景技术

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）作为邻苯二甲酸酯（PAEs）主要的同族物和环境中PAEs污染物的主要类型，作为增塑剂使用时，常与产品基质分子（PVC）之间以非共价键和弱次级分子相互作用聚合，由于非共价键键能低、键合力差，因此在日常生活生产中，塑料制品中的DBP很容易释放扩散到周围环境中，并造成积累，形成环境内分泌干扰物，对水环境、土壤等造成不可逆的毒害污染。同时，作为一种内分泌干扰物，邻苯二甲酸二丁酯具有很强的生殖毒性、致癌性和畸形性。美国、欧盟和中国已将邻苯二甲酸二丁酯列为环境检测的优先污染物，规定PAEs中邻苯二甲酸二丁酯是环境及食品中的必检项目之一。因此，检测海洋环境中的邻苯二甲酸二丁酯含量对评估生态环境安全具有重要的意义。

目前广泛应用于邻苯二甲酸二丁酯检测的方法有气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、酶联免疫吸附法（ELISA）、高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）、表面等离子体共振（SPR）以及生物传感器等。但这些方法存在预处理时间长、检测时间长、环境基质影响大、灵敏度低等缺点。因此，开发简单、快速、高选择性的复杂样品中邻苯二甲酸二丁酯的分析方法已成为迫切需要解决的问题。分子印迹比率荧光传感器作为一种新型传感器，具有分子印迹聚合物优良的选择性、特异性、机械稳定性、快速的平衡动力学和良好的重复使用性。此外，与传统的单发射荧光传感器相比，比率荧光具有高灵敏度、优良的自校正功能以及丰富的荧光颜色变化，可避免生物背景和环境干扰。因此，开发分子印迹比率荧光传感器高灵敏视觉测定海水中邻苯二甲酸二丁酯对近海岸环境保护和水产品安全具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种选择性强、灵敏度高、检测时间短、通量高的基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于分子印迹量子点荧光探针高通量检测邻苯二甲酸酯的方法，包括以下步骤：

（1）一步法红/蓝分子印迹量子点荧光探针的制备

A．将红、绿、蓝三种不同荧光发射的CdSe/ZnS QDs粉末分别用超纯水洗涤并抽滤10 min后，置于60℃真空干燥12 h，随后将5 mg红色荧光发射CdSe/ZnS QDs粉末和5 mg蓝色荧光发射CdSe/ZnS QDs粉末溶于4 mL三氯甲烷中得到红/蓝分子印迹量子点溶液，将0.4mg绿色荧光发射CdSe/ZnS QDs溶于2 mL乙醇中得到绿色CdSe/ZnS量子点溶液；

B.将4 mL TritonX-100分散到15 mL环己烷中后，加入200 μL的红/蓝分子印迹量子点溶液，400 r/min搅拌条件下，通过毛细管滴加0.1 mL正硅酸乙酯于反应体系中，然后滴加0.4 mL氨水，400 r/min搅拌2 h后，向反应体系中滴加0.45 mL的由3-氨丙基三乙氧基硅烷、邻苯二甲酸二丁酯和环己烷组成的混合溶液，于25-35℃，400 r/min磁力搅拌下孵育8-12 h，反应结束后，依次用丙酮、30vt%乙醇/水、体积比为8：2的乙醇/乙腈洗脱除去模板分子，得到对邻苯二甲酸二丁酯具有特异荧光抑制响应的红/蓝分子印迹量子点荧光探针，并分散于pH为8.0的盐质量浓度5‰的30%乙醇水溶液中使其终浓度为2.0 mg/L；

（2）样品前处理