[发明专利]基于微滴式数字PCR同时检测猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒的引物探针组及试剂盒在审
| 申请号： | 202210902239.2 | 申请日： | 2022-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN116334306A | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 孙圣福;陈伟;兰邹然;王旭东;李佳璇;赵学峰;刘存;王贵升;薛瑞雪;郑孟加;李玉杰 | 申请（专利权）人： | 山东省动物疫病预防与控制中心（山东省人畜共患病流调监测中心） |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 微滴式 数字 pcr 同时 检测 猪瘟 病毒 病毒性 腹泻 引物 探针 试剂盒 | ||
1.一种基于微滴式数字PCR同时检测猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组序列为：
CSFV-F：5’-GAGATGCTACGTGGACGAGG-3’；
CSFV-R：5’-CTAATAGTGGGCCTCTGCGG-3’ ；
CSFV-Probe：FAM-TCGCTAGGGTGAAATCACGCCACGTG-TAMRA；；
BVDV-F：5’-GACAAGCCTCGAGATGCCAC-3’；
BVFV-R：5’-ACCGTTTTCACCTGAACGACC-3’；
BVDV-Prboe：VIC-ACGAGGGCATGCCCACAGCACATCT-TAMRA。
2.一种含有权利要求1所述的引物探针组的试剂盒，其特征在于，具体组成为：CSFV-F、CSFV-R、CSFV-Probe、BVDV--F、BVDV-R、BVDV-Probe,2×supermx反应液、模板RNA和DEPC水组成。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述CSFV-F、CSFV-R、CSFV-Probe、BVDV--F、BVDV-R、BVDV-Probe在PCR反应体系内的体积比为：2:2:1:2:2:1。
4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性标准品质粒；所述阳性标准品质粒为CSFV阳性标准品质粒和/或BVDV阳性标准品质粒。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述CSFV阳性标准品质粒为含有核苷酸如Seq ID No.1所示的DNA分子；所述BVDV阳性标准品质粒为含有核苷酸如Seq ID No.2所示的DNA分子。
6.根据权利要求2-5任一项所述的试剂盒，其特征在于，利用所述试剂盒进行数字PCR扩增反应时，反应条件为55℃逆转录15min；95℃预变性10min；94℃变性30s，退火温度60℃1min，循环40次；12℃仪器冷却5min，4℃保存。
7.一种如权利要求2-6任一项所述的试剂盒在基于微滴式数字PCR同时检测猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒中的应用。
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