[发明专利]羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒及其在利用不同种属动物制备物为酶源筛选抑制剂中的应用

权利要求书

1.一种羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下四种试剂：I液、II液、III液、IV液和质控标准品；

其中所述I液为100mM磷酸盐缓冲液，pH＝5.5～8；

所述II液为100mM含有人CES1的特异性生物探针底物的溶液，溶剂为二甲基亚砜；

所述III液体为荧光素检测试剂，含0.5mM的ATP，10mM的Mg²⁺及50g/ml的荧光素酶；

IV液体为酶源，即10mg/ml的不同种属的重组表达CES1单酶的pH 6.5的磷酸盐溶液，不同种属是人、狗、猪、猴、兔、大鼠或小鼠；

所述质控标准品为10mM的羧酸酯酶广谱抑制剂。

2.根据权利要求1所述羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒，其特征在于，所述人CES1的特异性生物探针底物为4，5-二甲基-2(6-羟基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酯，其结构通式如式为：

在pH 5.5-8的缓冲体系中，上述化合物的甲酯键可被CES1特异性水解为相应水解产物4，5-二甲基-2(6-羟基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酸。

3.一种如权利要求1或2所述的羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒的应用，其特征在于，将所述的试剂盒用于利用不同种属的哺乳动物样本作为酶源进行该酶抑制剂的快速筛选与评估。

4.根据权利要求5所述的一种羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒的应用，其特征在于，所述快速筛选与评估为：以CES1的特异性生物探针底物的水解反应作为CES1的特异性探针反应，探针底物4，5-二甲基-2(6-羟基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酯被CES1特异性水解为萤火虫荧光素酶的底物；通过定量检测单位时间内样品中目标物的生物发光强度来表征水解产物的生成量，进而测定不同样本中人CES1的活性。

5.根据权利要求3或4所述的一种羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒的应用，其特征在于，所述的快速筛选与评估的方法包括以下步骤：

(1)预孵育：将待测样品与I液、IV液混匀，20～60度下孵育3～5分钟；

(2)起始反应：加入II液后混匀，20～60度下孵育2～120分钟；

(3)检测：加入III液体，混匀，37℃孵育20-30min，用酶标仪或化学发光分析仪测定样品；

(4)通过定量比较抑制剂存在与缺失状态下单位时间内水解产物的生成量评估该生物体系中CES1的残余活性，进而实现CES1抑制剂的快速筛选及抑制能力的定量评价。

6.根据权利要求3所述的一种羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒的应用，其特征在于，酶源是：重组表达的哺乳动物中不同种属的CES1单酶、含有CES1的不同种属中哺乳动物细胞/组织制备液、血浆或其他常见生物样本。

7.根据权利要求4所述的一种羧酸酯酶1抑制剂检测试剂盒的应用，其特征在于，待测样品为小分子化合物标准品、中药/植物提取物、复方中药制剂。