[发明专利]在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用及方法

说明书

本发明公开了在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用及方法，属于植物基因工程技术领域，该方法包含如下操作步骤：将AaMAPK6基因构建到植物双元表达载体上，然后在农杆菌介导下转化青蒿，经过荧光定量RCR检测、青蒿素含量测定后，筛选得到青蒿素含量提高的转基因植株，所述AaMAPK6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，过表达AaMAPK6基因的植株中，青蒿素含量升高明显，较野生型提高了1.26～1.56倍。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用，还涉及提高青蒿中青蒿素的方法。

背景技术

青蒿素是一种含有过氧化桥结构的倍半萜内酯化合物，在治疗抗氯喹型疟疾方面发挥着重要作用。世界卫生组织推荐青蒿素联合疗法作为治疗疟疾的首选方法。青蒿植株中青蒿素含量太低，不能满足患者特别是发展中国家患者治疗需求。因此如何提高青蒿素产量成为青蒿素生产中的重大问题及国内外研究热点。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)级联反应是真核生物中高度保守的信号通路，是由MAPKKK、MAPKK、MAPK三级蛋白激酶组成的磷酸化信号通路。参与调控植物生长发育、免疫应答，逆境胁迫等过程[Zhao et al.2017]。青蒿中已报道多个转录因子受JA强烈诱导表达并参与调控青蒿素生物合成，如ORA、bHLH112、NAC1等。在青蒿中是否存在MAPK激酶会响应植物激素的诱导，并与调控青蒿素生物合成的转录因子发生相互作用，进而影响青蒿素的生物合成？因此，鉴定药用植物青蒿中的MAPK激酶基因成为一种试图提高青蒿素产量的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用；本发明的目的之二在于提供提高青蒿中青蒿素含量的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用，所述AaMAPK6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2、一种提高青蒿中青蒿素含量的方法，包含如下步骤：通过在青蒿中过表达AaMAPK6基因，所述AaMAPK6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明优选的，所述在青蒿中过表达AaMAPK6基因的方法具体为：将AaMAPK6基因构建到植物双元表达载体上，然后在农杆菌介导下转化青蒿，筛选转基因植株，筛选到青蒿素含量提高的转基因植株。

本发明优选的，所述植物双元表达载体为以pHB载体为骨架载体。

本发明优选的，所述植物双元表达载体是将AaMAPK6基因通过BamHI和XbaI位点构建到pHB载体上。

本发明优选的，所述农杆菌为EHA105。

本发明优选的，所述筛选转基因植株的方法是采用荧光定量RCR检测。

本发明优选的，所述荧光定量RCR的上游引物如SEQ ID NO.10所示，下游引物如SEQ ID NO.11所示。

本发明优选的，所述荧光定量RCR的反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性10s，58℃退火20s，72℃延伸20s，40个扩增循环，每个循环的72℃延伸结束后采集荧光。