[发明专利]噬菌体展示介导的免疫多重定量PCR方法及其重组噬菌体在审
| 申请号： | 202210918587.9 | 申请日： | 2022-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN115537456A | 公开（公告）日： | 2022-12-30 |
| 发明（设计）人： | 王建勋;陈汉祎;李申;王伽利;和似琦;雒晨祎;王栋;钱朝晖;胡克平;胡丹丹;祈方昉 | 申请（专利权）人： | 北京中医药大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6804;C12N7/01;C12R1/92 |
| 代理公司： | 北京玄法律师事务所 16002 | 代理人： | 潘满根 |
| 地址： | 100029 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 噬菌体 展示 免疫 多重 定量 pcr 方法 及其 重组 | ||
1.噬菌体展示介导的免疫多重定量PCR方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1：将捕获抗体包被于孔板的孔底；
步骤2：将包被抗体的孔板加入封闭液封闭；
步骤3：加入重组噬菌体，使得重组噬菌体与所述捕获抗体充分结合；所述重组噬菌体基因组中同时插入了抗原序列和用于探针识别的序列，所述探针识别的序列用于同时检测不同的重组噬菌体，所述抗原序列用于与所述捕获抗体反应，所述抗原序列是至少二种以上；
步骤4：在所述重组噬菌体与所述捕获抗体充分结合后，裂解结合后的所述重组噬菌体，收集洗脱液，作为多重定量PCR反应模板；
步骤5：进行实时荧光多重定量PCR反应。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述抗原序列插入至所述噬菌体的pⅢ蛋白信号肽与结构区之间。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述探针识别的序列插入至所述噬菌体的结构区之后。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，将SARS-CoV-2RBD序列插入至M13KO7噬菌体的pⅢ蛋白信号肽与结构区之间，所述SARS-CoV-2RBD序列包括野生型和突变型序列。
5.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，步骤2中，以PBST配制2％BSA作为封闭液。
6.一种重组噬菌体，其特征在于，所述重组噬菌体基因组中同时插入了抗原序列和用于探针识别的序列，所述探针识别的序列用于同时检测不同的重组噬菌体，所述抗原序列用于与所述捕获抗体反应，所述抗原序列是至少二种以上。
7.根据权利要求6所述的重组噬菌体，其特征在于，将所述抗原序列插入至所述噬菌体的pⅢ蛋白信号肽与结构区之间。
8.根据权利要求6所述的重组噬菌体，其特征在于，将所述探针识别的序列插入至所述噬菌体的结构区之后。
9.根据权利要求6所述的重组噬菌体，其特征在于，将SARS-CoV-2RBD序列插入至M13KO7噬菌体的pⅢ蛋白信号肽与结构区之间，所述SARS-CoV-2RBD序列包括野生型和突变型序列。
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