[发明专利]一种量子点纳米荧光微球标记的双T增敏免疫层析检测卡及其应用

说明书

本发明公开一种量子点纳米荧光微球标记的双T增敏免疫层析检测卡及其应用。首先公开了双T增敏免疫层析试纸条包括PVC背板及设置在PVC背板上的依次排列的样品垫、结合垫、反应垫和吸收垫，邻垫之间须部分重叠；所述反应垫上从靠近所述结合垫端到靠近所述吸收垫端依次设置相互平行的检测线Tsubgt;2/subgt;线、检测线Tsubgt;1/subgt;线和质控线C线，检测线Tsubgt;1/subgt;线和检测线Tsubgt;2/subgt;线均包被重组串联VP1蛋白，质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；所述结合垫含有量子点荧光微球定向标记的鼠抗猪IgG抗体。进一步公开其在检测VP1抗体上的应用。本发明双T增敏免疫层析检测卡实现了猪口蹄疫病毒抗体高灵敏度定性和定量检测。

技术领域

本发明涉及动物医学体外诊断技术领域。更具体地，涉及一种量子点纳米荧光微球标记的双T增敏免疫层析检测卡及其应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdisease virus,FMDV)所引起的一种急性、热性、高度接触性的动物传染病。口蹄疫对偶蹄类动物具有严重的潜在经济威胁，中国将其列为一类动物疫病之首,OIE(世界动物卫生组织)将其列为必须报告的动物疫病之一(张显升,刘在新,赵启祖等。口蹄疫病毒基因组RNA结构与功能研究进展[J]。病毒学报，2011,17(4)：375～380)。

口蹄疫对畜牧业的危害极大，积极预防和控制是必要的。口蹄疫的有效控制关键在于早期检测，准确、快速的检测是防止口蹄疫的重要环节，一旦发现任何临床相似于口蹄疫的疾病都必须对其做出迅速的诊断，以便采取相应的紧急预防措施，反之将会导致疫情的大范围蔓延，对畜牧业生产造成巨大的损失。建立了一整套在中国切实可行的病毒检测、净化猪场、免疫控制等综合防治技术措施和防治模式，是符合中国畜牧业发展国情。因此，建立一套快速简便、高效精准检测技术是猪口蹄疫防控的前提条件。

猪口蹄疫诊断方法有多种，首先依据临床症状和病理变化可作出初步诊断，进一步确诊必须结合实验室检测，实验室检测主要有核酸检测和免疫学检测，目前已建立的核酸检测主要是普通PCR和荧光定量PCR方法，免疫学实验室诊断方法主要有有病毒的分离与鉴定、间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)和血清中和试验(SN)等。这些方法普遍存在灵敏度低、漏检、交叉反应严的问题，且目前的实验室检测需要专业的技术人员以及专业的实验室，且检测需要2～3个小时甚至数天才能出结果，并且实验仪器及耗材费用昂贵，不适合大规模筛查应用。因此，需要一种即时、快速、简便的适合现场的即时诊断产品来解决大规模筛查的问题，才能在基层大范围地推广使用。

量子点(Quantum dot，QD)又称半导体纳米晶，呈近似球形，其三维尺寸在2-10nm范围内，具有明显的量子效应。量子点的物理、光学、电学特性远优于现有有机荧光染料，具有灵敏度高、稳定性好、货架期长等优势，是新一代荧光标记探针的好选择。然而单体量子点粒径小、表面能高、不耐氧的缺点限制了其在生物检测方面的应用。

因此，需要提供一种新型量子点荧光纳米材料运用于免疫层析平台，以提高检测灵敏度，使猪口蹄疫快速检测成为现实。

发明内容

本发明的目的在于提供一种量子点纳米荧光微球标记的双T增敏免疫层析检测卡及其在口蹄疫病毒抗体检测中的应用，实现猪口蹄疫病毒抗体高灵敏度定性和定量检测。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：