[发明专利]一种防风快速鉴别方法

权利要求书

1.一种防风快速鉴别方法，其特征在于，其通过针对防风的特征引物的聚合酶链式反应，对防风进行快速鉴别，所述鉴别方法包括以下步骤：

步骤1，将防风、水防风各批供试药材提取总DNA；

步骤2，取特征引物ITS2F_31加无菌水稀释；

步骤3，所述特征引物ITS2F_31通过PCR反应程序获得扩增产物；

步骤4，将所述扩增产物与6×Loading buffer混匀后点于琼脂糖凝胶上，置于紫外灯下观察，拍照并保存；

步骤5，根据所述步骤4所得照片中显示，正品防风在约300bp有一条清晰条带，水防风在该位置无条带，阴性无干扰。

2.根据权利要求1所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，所述步骤1的具体步骤为：将防风、水防风各批供试药材，经75％乙醇擦拭表面，晾干，用研钵研磨成粉末，取研碎后的粉末20mg，用Dneasy PlantMini Kit DNA提取试剂盒提取试剂盒提取总DNA，备用。

3.根据权利要求1所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述特征引物ITS2F_31的序列为5'-GCCTGACCTGGGGTCACAGTCG-3'。

4.根据权利要求3所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述特征引物ITS2F_31的稀释浓度为10pmol/μL。

5.根据权利要求1所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，所述步骤3的具体步骤为：50μl体系中含有浓度为10pmol/μL的所述特征引物ITS2F_311μL，模板DNA 5μL，ApexHF HSDNA聚合酶预混体系25μL，剩余体积用无菌蒸馏水补足，通过PCR反应程序获得扩增产物。

6.根据权利要求5所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，在所述步骤3中，所述PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，59℃退火15s，72℃延伸45s，40个循环；72℃复性10min；获得所述扩增产物。

7.根据权利要求6所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，在所述步骤3中，所述PCR扩增反应在ABI Veriti梯度PCR仪上进行。

8.根据权利要求7所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，在完成所述PCR扩增反应后，取5μL扩增产物进行电泳检测。

9.根据权利要求8所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，所述电泳检测的条件为：电泳电压为100V，电泳时间为35min。

10.根据权利要求1所述的防风快速鉴别方法，其特征在于，所述步骤4的具体步骤为：取所述步骤3中所述扩增产物5μL，与6×Loading buffer 1.0μL混匀后点于3％琼脂糖凝胶上，用1×TAE电泳缓冲液在100V电压恒压电泳35min；

取出凝胶，置于紫外灯下观察，并用CAMAG成像系统拍照并保存。