[发明专利]一种防风快速鉴别方法

说明书

本发明公开一种防风快速鉴别方法，其包括通过针对防风的特征引物的聚合酶链式反应，对防风进行快速鉴别，其包括以下步骤：将各批供试药材提取总DNA；取特征引物ITS2F_31加无菌水稀释；通过PCR反应程序获得扩增产物；取所述扩增产物与6×Loadingbuffer混匀后点于琼脂糖凝胶上，置于紫外灯下观察，拍照并保存；根据照片中显示正品防风在约300bp有一条清晰条带，水防风在该位置无条带，阴性无干扰。本发明运用特异性扩增特征引物的PCR法是利用防风与水防风物种间遗传信息的差异而实现鉴别的分子生物学方法，利用特征引物通过PCR技术对防风进行快速鉴别，解决制药过程中防风药材快速质量控制的问题。

技术领域

本发明涉及中药质量检测技术领域，具体涉及一种防风快速鉴别方法。

背景技术

防风为伞形科植物防风属防风Saposhnikovia divaricata(Trucz.)Schischk.的干燥根，具有祛风解表、胜湿止痛的功效。由于临床用量不断增加，国内市场需求量持续加大，导致伪劣混杂，不法商人以次充好，以假冒真，打粉入药后难以辨认。

混伪品水防风为伞形科植物岩风属宽萼岩风Libanotis laticalycina Shan etshen的干燥根。防风与水防风的性状和化学成分极为相似，仅靠性状鉴别和化学分析难以进行品种的科学鉴定。故现阶段没有兼具快速检测、检测精准度高等优点的鉴别方法以可靠有效地区分防风和水防风。

发明内容

为了克服上述技术问题，本发明公开了一种防风快速鉴别方法。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：

一种防风快速鉴别方法，其通过针对防风的特征引物的聚合酶链式反应，对防风进行快速鉴别，所述鉴别方法包括以下步骤：

步骤1，将防风、水防风各批供试药材提取总DNA；

步骤2，取特征引物ITS2F_31加无菌水稀释；

步骤3，所述特征引物ITS2F_31通过PCR反应程序获得扩增产物；

步骤4，将所述扩增产物与6×Loading buffer混匀后点于琼脂糖凝胶上，置于紫外灯下观察，拍照并保存；

步骤5，根据所述步骤4所得照片中显示，正品防风在约300bp有一条清晰条带，水防风在该位置无条带，阴性无干扰。

上述的防风快速鉴别方法，其中所述步骤1的具体步骤为：将防风、水防风各批供试药材，经75％乙醇擦拭表面，晾干，用研钵研磨成粉末，取研碎后的粉末20mg，用DneasyPlantMini Kit DNA提取试剂盒提取试剂盒提取总DNA，备用。

上述的防风快速鉴别方法，其中在所述步骤2中，所述特征引物ITS2F_31的序列为5'-GCCTGACCTGGGGTCACAGTCG-3'。

上述的防风快速鉴别方法，其中在所述步骤2中，所述特征引物ITS2F_31的稀释浓度为10pmol/μL。

上述的防风快速鉴别方法，其中所述步骤3的具体步骤为：50μl体系中含有浓度为10pmol/μL的所述特征引物ITS2F_311μL，模板DNA 5μL，ApexHF HS DNA聚合酶预混体系25μL，剩余体积用无菌蒸馏水补足，通过PCR反应程序获得扩增产物。

上述的防风快速鉴别方法，其中在所述步骤3中，所述PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，59℃退火15s，72℃延伸45s，40个循环；72℃复性10min；获得所述扩增产物。

上述的防风快速鉴别方法，其中在所述步骤3中，所述PCR扩增反应在ABI Veriti梯度PCR仪上进行。

上述的防风快速鉴别方法，其中在完成所述PCR扩增反应后，取5μL扩增产物进行电泳检测。