[发明专利]一种提高软骨素-4-O-磺基转移酶-1表达效率及酶活的方法在审
| 申请号： | 202210922651.0 | 申请日： | 2022-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN115851560A | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 张帆;刘立明;刘浩宇;宋伟;吴静;齐俊平;刘佳 | 申请（专利权）人： | 衢州益康园生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12P19/26;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 324000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 软骨素 转移酶 表达 效率 方法 | ||
1.一种产人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1的重组大肠杆菌，其特征在于，将人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1与分子伴侣通过质粒共表达；所述人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；编码所述分子伴侣的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～8任一所示。
2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述质粒包括但不限于pET系列质粒、pRSFDuet系列质粒。
3.根据权利要求1或2所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌的宿主为E.coli Rosetta(DE3)。
4.一种提高重组大肠杆菌胞外人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1产量的方法，其特征在于，将人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1与分子伴侣通过质粒共表达；所述人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；编码所述分子伴侣的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～8任一所示。
5.一种发酵生产人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1的方法，其特征在于，将权利要求1～3任一所述的重组大肠杆菌，在培养基中发酵生产人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵是在TB培养基中发酵。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，利用IPTG诱导所述重组大肠杆菌产人源软骨素-4-O-磺基转移酶-1。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述诱导是将所述重组大肠杆菌培养至OD600≥0.6。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述诱导是将所述重组大肠杆菌培养至OD600≥0.6，用终浓度为25～50mg/L的IPTG在15～35℃诱导。
10.权利要求1所述的重组大肠杆菌或权利要求4～9任一所述的方法在生产硫酸软骨素或含硫酸软骨素的产品中的应用。
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