[发明专利]一种将成纤维细胞重编程为自主神经节类器官的方法

权利要求书

1.转录因子Ascl1、Phox2a和Hand2或转录因子Ascl1、Phox2b和Hand2在诱导产生自主神经节类器官中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的转录因子为DNA形式、RNA形式或蛋白质形式。

3.一种重编程获得自主神经节类器官的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.使离体哺乳动物体细胞中过表达或表达转录因子Ascl1、Phox2a和Hand2或转录因子Ascl1、Phox2b和Hand2，得到转基因细胞；

S2.将转基因细胞在神经元诱导培养基中诱导培养，得到自主神经节类器官。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤S1，包括以下步骤：将转录因子Ascl1、Phox2a和Hand2共同导入或将转录因子Ascl1、Phox2b和Hand2共同导入离体哺乳动物体细胞中，得到转基因细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的导入为通过分别构建表达各转录因子的慢病毒载体，然后共同导入所述的哺乳动物体细胞中。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的转录因子Ascl1的核苷酸序列如SEQID NO.1所示，转录因子Phox2a的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，转录因子Hand2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，转录因子Phox2b的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的体细胞为成纤维细胞。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的哺乳动物为人、小鼠、大鼠、猴、兔、牛、马、猪、狗或猫。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤S2的将转基因细胞在神经元诱导培养基中诱导培养，是将转基因细胞在神经元诱导培养基I中培养7天后，更换为神经元诱导培养基II继续培养7-13天，诱导培养期间，每2天更换一次培养基；所述的神经元诱导培养基I含1×B27、1×Pen/Strep、2ng/ml Dox、10ng/ml bFGF、100ng/ml IGF-1、10ng/mlBDNF和10ng/ml GDNF，余量为1:1的DMEM/F12基础培养基；所述的神经元诱导培养基II含10μM forskolin和10ng/ml BMP4，余量为所述的神经元诱导培养基I。

10.根据权利要求3-9任一项所述的方法获得的自主神经节类器官。