[发明专利]一种检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 202210928764.1 | 申请日： | 2022-08-03 |
| 公开（公告）号： | CN115856294A | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 万春和;赵敏;黄瑜;程龙飞;傅光华;陈红梅;傅秋玲;刘荣昌;江南松;施少华 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/543 |
| 代理公司： | 福州创蔚来知识产权代理有限公司 35290 | 代理人： | 郑艳艳 |
| 地址： | 350013 福建*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 圆环 病毒 orf3 有无 缺失 elisa 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒，其特征在于：它包括包被有鹅圆环病毒Cap重组蛋白的酶标板A以及包被有鹅圆环病毒ORF3重组蛋白的酶标板B。
2.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述鹅圆环病毒Cap重组蛋白的制备方法如下：
对鹅圆环病毒的Cap蛋白序列进行分析，经密码子优化后，得到优化后的鹅圆环病毒Cap蛋白氨基酸序列，再将对应的核苷酸序列全基因合成后插入pET30a中，经筛选后获得阳性重组表达质粒pET30a-GoCV-dCap，将重组表达质粒转化原核表达感受态细胞，并采用IPTG诱导表达，将获得的表达产物进行纯化，即得所述鹅圆环病毒Cap重组蛋白，其中，优化后的鹅圆环病毒Cap蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述鹅圆环病毒ORF3重组蛋白的制备方法如下：
将鹅圆环病毒的ORF3基因分析后，全基因合成相关核苷酸序列后，插入pET32a表达载体上，表达的鹅圆环病毒ORF3蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，经筛选后获得阳性重组表达质粒pET32a-GoCV-ORF3；将重组表达质粒转化原核表达感受态细胞，并采用IPTG诱导表达，将获得的表达产物进行纯化，即得所述鹅圆环病毒ORF3重组蛋白。
4.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述鹅圆环病毒Cap重组蛋白的包被浓度为2.85μg/mL，鹅圆环病毒ORF3重组蛋白的包被浓度为2.00μg/mL。
5.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于：它还包括：包被液、洗涤液、封闭剂、样品稀释液、酶标二抗、显色剂、终止液、阴性对照血清、ORF3基因未缺失鹅圆环病毒(即鹅圆环病毒自然感染)阳性对照血清、ORF3基因缺失鹅圆环病毒阳性对照血清。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的ELISA检测试剂盒在检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的应用。
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