[发明专利]一种检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用。所述ELISA检测试剂盒包括包被有鹅圆环病毒Cap重组蛋白的酶标板A以及包被有鹅圆环病毒ORF3重组蛋白的酶标板B。本发明以鹅圆环病毒Cap蛋白和ORF3蛋白作为包被抗原，建立GoCV间接ELISA检测方法，经组合后可用于区分鹅圆环病毒ORF3有无缺失。本发明的检测方法还具有检测快速、便捷的优点。本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

技术领域

本发明属于水禽传染病学领域，具体涉及一种检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用。

背景技术

根据国际病毒分类委员会(The International Committee on Taxonomy ofViruses，ICTV)最新分类，圆环病毒科(Circoviridae)包括两个属(Genus)：圆环病毒属(Circovirus)和圆圈病毒属(Cyclovirus)。目前，圆环病毒属包括鹦鹉喙羽病毒(Beak andfeather disease virus，BFDV)、鸭圆环病毒(Duck circovirus，DuCV)、鹅圆环病毒(Goosecircovirus，GoCV)、鸽圆环病毒(Pigeon circovirus，PiCV)、和猪圆环病毒1型、2型、3型和4型(PCV1、PCV2、PCV3、PCV4)等49个种(Species)成员(https://talk.ictvonline.org/taxonomy/)。

GoCV病毒颗粒为无囊膜、二十面体对称、单股负链环状闭合DNA病毒，直径约为15纳米(nm)。GoCV于1999年Soike等从生长发育不良、体重下降的患病鹅中发现。GoCV基因组全长为1821nt(或1820nt)，其5’-端具有典型的颈环结构，其顶部有1个保守的9碱基序列“TATTATT①AC”(①position 1)；其3’-端基因间区存在正向或反向的重复序列。和其他圆环病毒属成员基因组结构类似，GoCV还编码有两个大的开放阅读框(ORF)，位于病毒左侧病毒复制相关的非结构蛋白(Rep)和位于右侧的抗原相关的结构蛋白(Cap)。

酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。常用的ELISA方法包括间接法、夹心法和竞争法等；其中间接ELISA方法最常用，主要用于血清抗体的检测。在GoCV基因组中除ORF-V1和ORF-C1两个主要ORF之外，新鉴定的位于ORF-V1互补链上的第三个功能性ORF，命名为ORF3，但该编码区生物学功能及ORF3基因缺失突变株的病毒生物学等尚未见研究。为建立一种可用于研究GoCV的ORF3蛋白生物学功能的方法，本研究将GoCV的Cap蛋白和ORF3蛋白分别进行表达，将GoCV的Cap蛋白和ORF3蛋白结合建立血清学检测方法，用于区分鹅圆环病毒ORF3有无缺失。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用以及建立一种鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测方法。利用所述ELISA检测试剂盒可以对鹅圆环病毒ORF3有无缺失进行区分。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种检测鹅圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒，它包括包被有鹅圆环病毒Cap重组蛋白的酶标板A以及包被有鹅圆环病毒ORF3重组蛋白的酶标板B。

所述鹅圆环病毒Cap重组蛋白(GoCV-dCap蛋白)的制备方法如下：