[发明专利]一种用于检测黄曲霉毒素B1的磁分离检测试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于检测黄曲霉毒素B1的磁分离检测试剂盒，其特征在于，包括：

(1)碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白，所述碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

(2)抗原修饰的磁珠，所述抗原修饰的磁珠为采用完全抗原ABF1-BSA修饰在环氧树脂磁珠表面。

2.如权利要求1所述的磁分离检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白的合成方法包括以下步骤：将纳米抗体Nb基因和碱性磷酸酶基因通过连接体(G₄S)₃连接，形成重组基因，再将所述重组基因克隆到表达载体后，转入大肠杆菌表达，即得碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白。

3.如权利要求2所述的磁分离检测试剂盒，其特征在于，所述重组基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.如权利要求1所述的磁分离检测试剂盒，其特征在于，所述抗原修饰的磁珠的制备方法包括以下步骤：将环氧树脂磁珠、黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白连接物反应，室温垂直混悬10-15h，采用磁珠封闭缓冲液封闭磁珠的活性位点，获取抗原修饰的磁珠。

5.如权利要求4所述的磁分离检测试剂盒，其特征在于，所述环氧树脂磁珠的直径为0.3μm-2.6μm；

所述环氧树脂磁珠、黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白连接物的质量比为(10-20)：1。

6.一种检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)建立检测系统：将权利要求1中所述碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白、所述抗原修饰的磁珠以及黄曲霉毒素B1标准物在PBS中混合，然后于37℃孵育后，通过磁性吸附收集碱性磷酸酶-纳米抗体-黄曲霉毒素B1完全抗原-磁珠复合物，之后再加入碱性磷酸酶化学发光底物，检测与抗原修饰的磁珠结合的碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白的化学发光强度，获取标准曲线；

(2)采用步骤(1)相同的方法结合所得标准曲线，获取待测样品中黄曲霉毒素B1的含量。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白、所述抗原修饰的磁珠以及黄曲霉毒素B1标准物体积比为3:4:3；所述碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白的稀释比例为(1:250)-(1:2000)，所述抗原修饰的磁珠的浓度为0.0625-0.5mg/mL，所述黄曲霉毒素B1的浓度为1×10⁰-1×10⁵pg/mL。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗原修饰的磁珠粒径为0.3μm，所述碱性磷酸酶纳米抗体稀释倍数为1：250，所述完全抗原修饰的磁珠浓度为0.25mg/mL。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，孵育时间为20min；

加入所述发光底物之前，还包括用PBST缓冲液洗涤所述碱性磷酸酶-纳米抗体-黄曲霉毒素B1完全抗原-磁珠复合物的步骤，洗涤1次；所述发光底物为APS-5。

10.如权利要求1-5任一项所述的磁分离检测试剂盒在检测食品中黄曲霉毒素B1中的应用。