[发明专利]一种用于检测黄曲霉毒素B1的磁分离检测试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种用于检测黄曲霉毒素B1的磁分离检测试剂盒和方法，属于生物技术领域。所述磁分离检测试剂盒包括碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白和抗原修饰的磁珠，所述碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述抗原修饰的磁珠为采用完整抗原ABF1修饰在环氧树脂磁珠表面。本发明基于碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白和抗原修饰的环氧树脂磁珠，开发了一种操作更简单、更快速的黄曲霉毒素B1检测的磁分离竞争性化学发光免疫分析法。该方法可以实现高特异性和高灵敏性检测黄曲霉毒素B1，同时为食品污染物的高灵敏度分析提供快速、简便、可靠的策略，具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种用于检测黄曲霉毒素B1的磁分离检测试剂盒和方法。

背景技术

黄曲霉毒素B1(AFB1)是目前已发现的20多种黄曲霉毒素中最主要和最具毒性的一种，它的污染主要出现在热带和亚热带地区。然而，由于气候环境的变化，AFB1污染的区域分布在未来几年可能会增加，这也意味着污染可能发生在许多迄今为止安全的环境中。研究表明，长期接触AFB1会导致人类的癌症、慢性中毒、出生缺陷甚至是基因改变，巨大的经济损失随之而来。由于缺乏高效和稳定的解毒手段，食物链的积累成为上述问题的主要途径。这就加强了对快速检测能力的需求，这种快速和定量的分析对于提供及时的监测或预警具有重要意义。

通过采用高效液相色谱法、色谱法和质谱法对AFB1进行检测，已经做了大量的工作并取得了一定的成绩。然而，上述方法耗时的预处理步骤和需要专业操作人员使AFB1的检测具有挑战性。利用抗体和抗原特异性结合的免疫测定法由于其普遍适用性、高灵敏度、简单和低成本的优势而被广泛认可和使用。但目前免疫测定的一个主要缺陷是，识别和产生信号需要独立的试剂。这使得标记、固定化或洗涤的程序不可避免，这进一步增加了检测的分析时间。此外，标记和复杂的分析步骤也增加了批次差异和分析误差。抗体是分子识别和检测的核心，在最广泛使用的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb)中，需要克服一些关键的缺点，包括分子量大、制备过程昂贵、可重复性差和容易失活等。目前利用碱性磷酸酶(ALP)与纳米抗体的融合构建了许多一步免疫分析方法，如伏马菌素B1、猪圆环病毒2型和赭曲霉毒素A。虽然一步免疫分析简化了检测过程，但目标或识别抗体的固定化仍很耗时，因此建立即插即用免疫分析的目标要求仍未得到满足。基于以上考虑，亟需提供一种即插即用和快速读出的免疫分析方法用于AFB1的检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测黄曲霉毒素B1的磁分离检测试剂盒和方法，以解决上述现有技术存在的问题，基于高耐受性和稳定性的纳米抗体的磁分离竞争性化学发光免疫分析法灵敏快速检测黄曲霉毒素B1，为食品污染物的高灵敏度分析提供快速、简便、可靠的策略，具有重要意义。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用于检测黄曲霉毒素B1的磁分离检测试剂盒，包括：

(1)碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白，所述碱性磷酸酶纳米抗体融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：