[发明专利]前列腺癌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针

权利要求书

1.一种前列腺癌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括基于实时荧光核酸恒温扩增方法的分别特异性检测以下基因的试剂：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR和MALAT1；

任选地，所述试剂盒还包括基于实时荧光核酸恒温扩增方法的特异性检测SPDEF基因和/或KLK3基因的试剂，所述SPDEF基因和/或KLK3基因作为检测内参基因。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，针对每一种基因的特异性检测试剂包括与该种基因对应的：

(1)核酸提取液：其包含含有特异性捕获探针的固相支持物和第一引物，其中所述捕获探针用于捕获基因序列，所述第一引物用于与基因序列中的靶标序列特异性结合；

(2)检测液a：其包含第二引物，所述第二引物与所述第一引物配合，用于扩增靶标序列；

(3)检测液b：其包含第一引物和靶标检测探针，其中所述靶标检测探针与靶标的扩增产物RNA拷贝特异性结合；

任选的，试剂盒中还包括：

(4)SAT酶液：其包含至少一种RNA聚合酶和M-MLV反转录酶。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，

特异性检测以下基因的特异性捕获探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1-10所示：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR、MALAT1、SPDEF和KLK3；

特异性检测以下基因的第一引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:11-20所示：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR、MALAT1、SPDEF和KLK3；

特异性检测以下基因的第二引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:21-30所示：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR、MALAT1、SPDEF和KLK3；

特异性检测以下基因的靶标检测探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:31-40所示：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR、MALAT1、SPDEF和KLK3，在所述靶标检测探针的核苷酸序列两端分别携带有荧光报告基团和淬灭基团。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括外源内标，其核苷酸序列如SEQ ID NO:61所示；

可选地，所述试剂盒还包括特异性检测所述外源内标的内标捕获探针、第一内标引物、第二内标引物和内标检测探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:62-65所示，且在所述内标检测探针的核苷酸序列两端分别携带有荧光报告基团和淬灭基团。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：

(5)洗涤液：其含有NaCl和SDS，可选地含有5-50mM HEPES、50-500mM NaCl、0.5-1.5％SDS、1-10mM EDTA；和/或

(6)矿物油；和/或

(7)阳性对照：分别含有以下基因核酸的体外转录RNA的体系：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR和MALAT1，以及SPDEF和/或KLK3；和/或

(8)阴性对照：一不含有以下基因核酸的体系：PCA3、ERG、SPDEF、KLK3、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR和MALAT1；和/或

(9)阳性标准品：浓度梯度分别为10²-10⁷拷贝/μL的分别含有以下基因核酸的体外转录RNA的体系：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR和MALAT1，以及SPDEF和/或KLK3；和/或

(10)标准曲线：分别针对以下基因的纵坐标为靶标dt值/内标dt值、横坐标为浓度log值的标准曲线：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR和MALAT1，以及SPDEF和/或KLK3。