[发明专利]前列腺癌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针

说明书

本发明公开一种前列腺癌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针，属于肿瘤诊断技术领域。提供的试剂盒包括基于实时荧光核酸恒温扩增方法的分别特异性检测以下基因的试剂：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR和MALAT1，以及任选的SPDEF和/或KLK3，该试剂盒能够以患者随机尿液作为待测样本高灵敏度检出前列腺癌(包括血PSA灰区)，并具有极高的阴性预测值，因此能够有效避免阴性对象进行不必要的前列腺穿刺活检。

技术领域

本发明属于肿瘤诊断技术领域，具体涉及一种适用于实时荧光核酸恒温扩增检测体系的前列腺癌检测试剂盒及其专用引物和探针。

背景技术

前列腺癌(prostate cancer，PCa)的发病率在泌尿系统肿瘤发病率中排名首位。目前前列腺癌临床诊断方式主要包括：直肠指检、直肠前列腺B超及多参数核磁共振等影像学检查，和血PSA(Prostate Specific Antigen)检测。直肠检测对前列腺癌的诊断敏感性和特异性均较低，且受人为素影响大；以多参数核磁共振为代表的影像学检查仅对临床有意义型前列腺癌具有较好的诊断效果，但对一些早期前列腺癌的诊断仍有一定局限性；通过前列腺穿刺活检检测血PSA是目前诊断前列腺癌的金标准，但在血PSA灰区(4-10ng/mL)人群患者中仅有25％左右的阳性检出率，造成了约75％的患者经历不必要的穿刺活检。另外，前列腺穿刺活检还会对患者造成较大痛苦，亦有发生感染等风险。因此，急需一种无创的且适用于血PSA灰区人群患者的前列腺癌检测方法。

专利文献CN111518908A(以下称文献1)公开一种尿液前列腺癌标志物组合及其在制备精准诊断试剂中的用途，该文献1以TMPRSS2-ERG(T2ERG)、PCA3、SChLAP1、MALAT1、TTTY15-USP9Y、HOXC6和DLX1为检测前列腺癌的标志物组合，可以以尿液为检测样本，且能够高特异性(78.0％)和高灵敏度(87.8％，表示可以将87.8％的阳性患者筛查出来)地对前列腺癌患者(包括血PSA灰区患者)进行检测和筛查(AUC最大为0.87(95％CI：0.78-0.93))。然而，一方面，该文献1公开的是适用于PCR反应体系的检测前列腺癌标志物的组合，PCR反应过程中需要温度的升降和循环，因此所需检测时间较长，效率较低，同时需要使用荧光定量PCR仪，增加了检测成本；另外，PCR的反应产物为DNA，不易降解，容易导致样本交叉污染和实验环境的污染；另一方面，虽然该文献1能够实现高准确度检测前列腺癌的目的，但其检测的灵敏度仍偏低，且阴性预测值也偏低(81.3％，表示在实际阴性对象中仅判定有81.3％的检测对象为真阴性)，因此仍有较多的阳性患者筛查不到，以及有较多的阴性对象需要经历不必要的穿刺活检。

发明内容

针对现有技术中存在的一个或多个问题，本发明一个方面提供一种前列腺癌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其包括基于实时荧光核酸恒温扩增方法的分别特异性检测以下基因的试剂：PCA3、ERG、DLX1、HOXC6、HOXC4、TDRD1、AMACR和MALAT1；任选地，所述试剂盒还包括基于实时荧光核酸恒温扩增方法的特异性检测SPDEF基因和/或KLK3基因的试剂，所述SPDEF基因和/或KLK3基因作为检测内参基因。

在一些实施方式中，针对每一种基因的特异性检测试剂包括与该种基因对应的：

(1)核酸提取液：其包含含有特异性捕获探针的固相支持物和第一引物，其中所述捕获探针用于捕获基因序列，所述第一引物用于与基因序列中的靶标序列特异性结合；

(2)检测液a：其包含第二引物，所述第二引物与所述第一引物配合，用于扩增靶标序列；

(3)检测液b：其包含第一引物和靶标检测探针，其中所述靶标检测探针与靶标的扩增产物RNA拷贝特异性结合；

任选的，试剂盒中还包括：

(4)SAT酶液：其包含至少一种RNA聚合酶和M-MLV反转录酶。

在一些实施方式中，