[发明专利]一种采用LC-MS法检测血浆中替米沙坦氨氯地平的方法

说明书

本发明公开了一种采用LC‑MS法检测血浆中替米沙坦氨氯地平的方法，该方法用0.5％氨水‑乙腈对血浆样品进行蛋白沉淀、进样LC‑MS/MS检测。该方法能同时检测替米沙坦和氨氯地平，同时具有快速、高灵敏，使用少量血浆就能同时监测两个组分的特点，可以应用于替米沙坦氨氯地平的药代动力学与生物等效性研究。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种液相色谱-串联质谱法检测血浆中替米沙坦氨氯地平的方法。

背景技术

替米沙坦氨氯地平片(80/5mg/片)是一种固定剂量联合使用治疗高血压的复方制剂。替米沙坦(Telmisartan，本文中可简称“TM”)，化学名为4′-[4-甲基-6-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-2-丙基-1H-苯并咪唑-1-基甲基]联苯基-2-羧酸，分子式为C₃₃H₃₀N₄O₂，是一种新型的降血压药物，是一种特异性血管紧张素Ⅱ受体(AT1型)拮抗剂，用于治疗原发性高血压。替米沙坦与其它类抗高血压药物相比有以下特点：具有受体作用的专一性、抗高血压作用显著、具有良好的利尿作用、能改善心肌狭窄障碍。氨氯地平(Amlodipine，本文中可简称“AL”)，化学名为6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1，4-二氢-3，5-吡啶二甲酸甲乙酯，分子式为C₂₀H₂₅ClN₂O₅，为一种长效二氢吡啶类钙拮抗剂，用于治疗高血压及冠状动脉疾病。以上两种药物联合使用在众多临床试验中被证明具有高度的降压效果，并提示联合使用治疗高血压可能比单药治疗更有效。现有技术对单一组分的检测方法已经相当成熟，故开发一种同时对复方制剂中两个待测组分的检测并经过充分验证的且适用性高的分析方法是势在必行的。

现有技术“张鹤.复方氨氯地平替米沙坦的体内分析方法及其临床前药代动力学研究[D].上海：第二军医大学，2010，11-21.”公开一种采用LC-MS/MS分别建立定量方法检测血浆中氨氯地平和替米沙坦，其中氨氯地平预处理采用100μL血浆加入1mol.L^-1NaOH 20μL，加入内标20μL，振摇10min，加入萃取剂1mL乙酸乙酯后振摇3min，5000r.min^-1离心10min，取上层0.8mL挥干后加入100μL流动相复溶，进样量20μL，分析时间4min，线性范围：2.03～507.5ng.mL^-1；替米沙坦预处理采用40μL血浆加入含内标的乙腈沉淀剂160μL，振摇1min，12000r.min^-1离心10min，取上清液进样，进样量20μL，分析时间11min，线性范围：5.025～1005ng.mL^-1。但是该方法进样量大，分析时间长，且两个待测组分需进行分开检测，操作更为复杂，也会大大延长生物样品检测时间。

中国测试，2019年7期，李艳玲、王曼等，UPLC-MS/MS同时测定人血浆中替米沙坦与氨氯地平浓度，公开一种采用UPLC-MS/MS法测定人血浆中替米沙坦与氨氯地平的方法，采用Waters BEH C18(2.1mm×50mm，1.7μm)色谱柱，流动相A：甲酸：氨水：水(1：0.2：1000，v/v/v)，流动相B：甲酸：氨水：乙腈：水(1：0.2：950：50，v/v/v/v)，进行梯度洗脱，流量0.3mL/min，以d3-替米沙坦、d4-氨氯地平作内标。血浆样本液液萃取后，采用SHIMADZU SIL-30 AD型UPLC进样分离，美国AB Sciex QTRAP 5500质谱仪在MRM模式下检测。该方法采用二氯甲烷：异丙醇＝97：3萃取处理血浆血浆，离心操作才能取上清液进样，血浆处理操作比较复杂，而且血浆100μL经萃取得到复溶体积仅为50μL检测样品，因而该处理方式对血浆需求量仍然较大。