[发明专利]一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株为vβHSD基因缺失或敲除的野生型大口黑鲈虹彩病毒株。

2.一种带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株为vβHSD基因缺失，且在基因缺失的部位通过同源重组插入筛选标记基因的野生型大口黑鲈虹彩病毒株。

3.根据权利要求2所述的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述筛选标记基因包括绿色荧光蛋白基因和嘌呤霉素基因；优选地，所述绿色荧光蛋白基因和嘌呤霉素基因通过T2A序列连接；进一步优选地，所述筛选标记基因的基因序列如SEQ ID NO:5所示。

4.根据权利要求2或3所述的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述vβHSD基因的基因序列为与SEQ ID NO:1所示序列具有至少95％同源性的核苷酸序列。

5.权利要求1所述的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株的构建方法。

6.权利要求2～4中任一项所述的带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株的构建方法，包括以下步骤：通过同源重组的方法将野生型大口黑鲈虹彩病毒株的vβHSD基因进行缺失，获得大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法具体包括以下步骤：

(1)分别扩增野生型大口黑鲈虹彩病毒株vβHSD基因的上臂基因和下臂基因；

(2)将步骤(1)的上臂基因和下臂基因分别连接到表达筛选标记基因的表达盒上，得到同源重组片段；

(3)将步骤(2)的同源重组片段转染鳜脑细胞，与LMBV病毒液混合孵育，收集病变且存在绿色荧光的细胞，即得到大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

8.权利要求1所述的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株或权利要求2～4中任一项所述的带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株在(a)～(c)中任一项中的应用；

(a)提供解析大口黑鲈虹彩病毒蛋白功能的工具；

(b)制备治疗或预防大口黑鲈虹彩病毒疾病的试剂或药物；

(c)制备诊断大口黑鲈虹彩病毒疾病的试剂。

9.一种疫苗，包含权利要求1所述的口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株或权利要求2～4中任一项所述的带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

10.根据权利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括药学上可接受的诊断剂、载剂、赋形剂和稀释剂中的至少一种。