[发明专利]一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制备方法与应用

说明书

本发明属于水产养殖疾病防控领域，公开了一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制备方法与应用，具体公开了一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株，所述大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株为vβHSD基因缺失或敲除的野生型大口黑鲈虹彩病毒株。本发明提供的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除病毒株，该病毒株缺失vβHSD基因，进而降低了亲本毒株的毒性，具有良好的安全性能，为未来成功制备大口黑鲈虹彩病毒疫苗提供了理论依据和实践参考。

技术领域

本发明属水产养殖疾病防控领域，具体涉及一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制备方法与应用。

背景技术

大口黑鲈，又称加州鲈，是我国重要的经济养殖鱼类，具有养殖周期短、营养价值高、肉质鲜美等特点，深受养殖户和消费者欢迎。近年来，我国大口黑鲈养殖业发展迅速，养殖产量逐年升高，2020年全国养殖总产量超过60万吨。

近年来，病毒性烂身病是养殖大口黑鲈中流行性最广、危害性最大的病害之一，其病原为虹彩病毒科、蛙病毒属的大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus，LMBV)。该病毒的主要流行期在5月至10月的高温季节，可感染不同规格的大口黑鲈，流行期的发病率可达80％以上，最高死亡率在60％以上，每年对水产养殖业造成了巨大的经济损失。疫苗作为一种绿色、健康的病害防控手段，在水产病毒病的防治中有着重要的价值。开展大口黑鲈虹彩病毒的疫苗研究，对推进大口黑鲈养殖的健康发展意义重大。

研发发现，蛙病毒主要侵染宿主的单核细胞，且具有较长的潜伏期，活毒疫苗所激发的细胞免疫将发挥重要的免疫作用。目前，关于通过基因缺失构建减毒疫苗株的报道并不少见，如伪狂犬病毒的TK基因缺失株、肿大细胞病毒vSOCS/vTK双基因敲除株、虎纹蛙病毒vIF2αH基因缺失株等，均能有效地降低病毒的毒力，并能起到有效地免疫保护效果。但是，目前尚没有关于大口黑鲈虹彩病毒基因缺失株构建的研究，制约着大口黑鲈虹彩病毒减毒疫苗的筛选和研制。

发明内容

本发明第一方面的目的，在于提供一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

本发明第二方面的目的，在于提供一种带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

本发明第三方面的目的，在于提供本发明第一方面的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株的构建方法。

本发明第四方面的目的，在于提供本发明第二方面的带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株的构建方法。

本发明第五方面的目的，在于提供本发明第一方面的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株或本发明第二方面的带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株的应用。

本发明第六方面的目的，在于提供一种疫苗。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供一种大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株，所述大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株为所述大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株为vβHSD基因缺失或敲除的野生型大口黑鲈虹彩病毒株。

优选地，所述vβHSD基因的基因序列为与SEQ ID NO:1所示序列具有至少95％同源性的核苷酸序列。

进一步优选地，所述vβHSD基因的基因序列为与SEQ ID NO:1所示序列具有至少98％、至少99％或100％同源性的核苷酸序列。

本发明的第二个方面，提供一种带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株，所述带有筛选标记的大口黑鲈虹彩病毒vβHSD基因敲除株为vβHSD基因缺失，且在基因缺失的部位通过同源重组插入筛选标记基因的野生型大口黑鲈虹彩病毒株。

优选地，所述筛选标记基因包括绿色荧光蛋白基因和嘌呤霉素基因。