[发明专利]一种提高NK细胞慢病毒转导效率的方法

说明书

本发明提供了一种提高NK细胞慢病毒转导效率的方法，属于细胞转导技术领域。本发明针对NK细胞外源基因转导的瓶颈问题，用编码BaEV糖蛋白序列替换慢病毒表面本身的包膜蛋白VSVG蛋白，利用BaEV胞膜糖蛋白能特异性结合N细胞膜上的ASCT2，提高NK细胞慢病毒转导效率，同时将NK细胞诱导成记忆样NK细胞进一步提高了原代NK细胞的慢病毒转导效率，因此本发明提供的方法实现了对天然免疫细胞的稳定基因修饰，为肿瘤免疫治疗提供了基础。

技术领域

本发明属于细胞转导技术领域，具体涉及一种提高NK细胞慢病毒转导效率的方法。

背景技术

目前，以免疫检查点抑制剂为代表的肿瘤免疫治疗为部分肿瘤患者带来显著生存获益，然而大部分患者对其反应不佳或存在原发性抵抗^[1]。因此，全球正在加快研发各种新的免疫治疗手段。嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor,CAR)免疫细胞，作为一种基因工程化免疫细胞治疗方法，能够精准、快速、高效地杀灭肿瘤，成为一种极具前景的新型肿瘤免疫治疗方法^[2]。目前，经CAR修饰的T细胞(CAR-T)已经在血液恶性肿瘤中获得惊人的疗效，然而，因肿瘤特异性抗原靶点的选择、受限的肿瘤内浸润、肿瘤内免疫抑制性微环境、肿瘤细胞异质性这些因素限制了基于CAR的基因工程化免疫细胞在恶性实体瘤治疗中的临床应用^[3]。CAR-NK细胞因为具有更高安全性、多重靶细胞杀伤途径、易制备通用型细胞产品等独特生物学优势使它具有更广阔前景及巨大临床价值的免疫治疗手段^[4]。然而，当前CAR-NK细胞的临床转化应用仍然面临基因修饰难度大的问题^[4]。因此，研发一套能够高效进行NK细胞基因修饰的技术是当前CAR-NK细胞实现有效临床转化应用的技术瓶颈。

当前，有多种外源基因导入办法，包括慢病毒、逆转录病毒、腺病毒、转座子技术及各种瞬时表达技术等。目前针对原代NK细胞的临床研究(包括新英格兰医学杂志最新报道的CAR-NK细胞临床研究^[5])几乎用的是逆转录病毒或者瞬时表达技术^[4]；然而，逆转录病毒更容易导致宿主基因插入突变，这种风险很大程度上限制了其临床应用^[6]。慢病毒是比较理想的基因导入技术，可将外源基因整合至宿主基因组高效稳定地表达，且导致宿主基因插入突变的风险低。目前基因转导所用慢病毒通常使用VSV-G作为包膜蛋白，因为VSV-G包膜蛋白对多种物种和细胞类型具有广泛的取向性。然而，NK细胞是天然免疫细胞，对慢病毒存在天然的抵抗及清除机制，慢病毒对NK细胞的转导效率通常仅有3％左右，远远无法满足临床的需求。

参考文献:

[1]Kim TK,Vandsemb EN,Herbst RS,Chen L.Adaptive immune resistance atthe tumour site:mechanisms and therapeutic opportunities.NAT REV DRUG DISCOV2022.

[2]Rafiq S,Hackett CS,Brentjens RJ.Engineering strategies to overcomethe current roadblocks in CAR T cell therapy.NAT REV CLIN ONCOL 2020,17(3):147-167.

[3]Larson RC,Maus MV.Recent advances and discoveries in themechanisms and functions of CAR T cells.NAT REV CANCER 2021,21(3):145-161.

[4]Xie G,Dong H,Liang Y,Ham JD,Rizwan R,Chen J.CAR-NK cells:Apromising cellular immunotherapy for cancer.EBIOMEDICINE 2020,59:102975.