[发明专利]基因编辑系统及其在构建HPS1基因突变的海普综合症模型猪核移植供体细胞中的应用在审
| 申请号： | 202210955222.3 | 申请日： | 2022-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN116064523A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;马翔;王磊;程锐;曾为俊;赵泽英;方园;胡世芳 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N9/22;C12N15/85;C12N15/89;C12N15/70;C12N15/87;C12N15/62;C12N5/10;C12Q1/02;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因 编辑 系统 及其 构建 hps1 基因突变 综合症 模型 移植 供体 细胞 中的 应用 | ||
1.HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用；
所述HPS1-gRNA1为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：16中第3-22位核苷酸所示；所述HPS1-gRNA4为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：17中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备海普综合症模型猪；(c)制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。
2.HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用；
HPS1-gRNA1为权利要求1中所述的HPS1-gRNA1；
HPS1-gRNA4为权利要求1中所述的HPS1-gRNA4；
所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备海普综合症模型猪；(c)制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。
3.HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和特异质粒在制备试剂盒中的应用；
HPS1-gRNA1为权利要求1中所述的HPS1-gRNA1；
HPS1-gRNA4为权利要求1中所述的HPS1-gRNA4；
所述特异质粒自上游至下游依次包括如下元件：启动子、操纵子、核糖体结合位点、PRONCN蛋白的编码基因、终止子；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备海普综合症模型猪；(c)制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。
4.一种试剂盒，包括HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和NCN蛋白；
HPS1-gRNA1为权利要求1中所述的HPS1-gRNA1；HPS1-gRNA4为权利要求1中所述的HPS1-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备海普综合症模型猪；(c)制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。
5.一种试剂盒，包括HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和PRONCN蛋白；
HPS1-gRNA1为权利要求1中所述的HPS1-gRNA1；HPS1-gRNA4为权利要求1中所述的HPS1-gRNA4；PRONCN蛋白为权利要求2中所述的PRONCN蛋白；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备海普综合症模型猪；(c)制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。
6.一种试剂盒，包括HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和特异质粒；
HPS1-gRNA1为权利要求1中所述的HPS1-gRNA1；HPS1-gRNA4为权利要求1中所述的HPS1-gRNA4；特异质粒为权利要求3中所述的特异质粒；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备海普综合症模型猪；(c)制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。
7.一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：将HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞；HPS1-gRNA1为权利要求1中所述的HPS1-gRNA1；HPS1-gRNA4为权利要求1中所述的HPS1-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白。
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