[发明专利]基因编辑系统及其在构建HPS1基因突变的海普综合症模型猪核移植供体细胞中的应用

说明书

本发明公开了基因编辑系统及其在构建HPS1基因突变的海普综合症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO：16所示HPS1‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示HPS1‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将HPS1‑gRNA1、HPS1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为HPS1基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备海普综合症模型猪；制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。本发明对于海普综合症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体属于基因编辑技术领域，更具体涉及基因编辑系统及其在构建HPS1基因突变的海普综合症模型猪核移植供体细胞中的应用。

背景技术

海普综合症(Hermansky-Pudlak-syndrome)，又叫海普二式综合征，是一种罕见的常染色体隐性遗传病，其特征是溶酶体相关细胞器的生物合成缺陷。临床表现包括由于血小板delta储存池缺乏导致的出血性疾病、眼睛皮肤白化病、炎症性肠病、中性粒细胞减少症和肺纤维化。该疾病在波多黎各地区较为常见，目前已知有10种不同基因的缺陷均可导致海普综合症，其中由HPS1、HPS4基因缺陷引起的临床症状较为严重，由HPS3、HPS5和HPS6基因缺陷引起的临床症状则较轻，由HPS7、HPS8和HPS9基因缺陷引起的极为罕见。

研究海普综合症的发生发展机制及研发相应的药物均需要在动物模型的基础上进行，目前常用的动物模型为小鼠模型，然而小鼠不论从体型、器官大小、生理、病理等方面都与人相差巨大，不能真实地模拟人类正常的生理、病理状态。猪作为大动物，其体型大小和生理功能与人类近似，易于大规模繁殖饲养，而且在伦理道德及动物保护等方面要求较低，是理想的人类疾病模型动物。

基因编辑是近年来不断取得重大发展的一种生物技术，其包括从基于同源重组的基因编辑到基于核酸酶的ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等编辑技术，其中CRISPR/Cas9技术是当前最先进的基因编辑技术。目前，基因编辑技术被越来越多地应用到动物模型的制作上。

发明内容

本发明的目的是提供基因编辑系统及其在构建HPS1基因突变的海普综合症模型猪核移植供体细胞中的应用。

本发明提供了HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和特异质粒在制备试剂盒中的应用。

本发明提供了一种试剂盒，包括HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和NCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和PRONCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和特异质粒。

以上任一所述试剂盒还包括猪细胞。

以上任一所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备海普综合症模型猪；(c)制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。

本发明提供了一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：将HPS1-gRNA1、HPS1-gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。

所述共转染具体采用电击转染的方式。

电击转染的参数设置具体可为：1450V、10ms、3pulse。