[发明专利]筛选自身免疫性肝病药物的方法

权利要求书

1.一种筛选自身免疫性肝病药物的方法，包括：

提供测试组动物和参照组动物，其中，所述测试组动物和所述参照组动物均包括自身免疫性肝病动物模型，其中，所述自身免疫性肝病动物模型的基因型为调节性T细胞条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶/载脂蛋白基因型；

向所述测试组动物施用自身免疫性肝病候选药物；

监测所述测试组动物的第一生化指标数据变化趋势和所述参照组动物的第二生化指标数据变化趋势；

通过对比所述第一生化指标数据变化趋势和所述第二生化指标数据变化趋势，从所述候选药物中确定目标药物。

2.根据权利要求1所述的方法，还包括：

经过预设时长后，处死所述测试组动物和所述参照组动物；

分别对所述测试组动物和所述参照组动物进行病理切片；

通过分析所述测试组动物和所述参照组动物的病理切片结果，从所述候选药物中确定所述目标药物。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，自身免疫性肝病动物模型的建立方法，包括：

将载脂蛋白基因型小鼠与第一基因型小鼠按照预设比例进行交配，得到第一代双基因杂合子小鼠；其中，所述第一基因型小鼠的基因型为调节性T细胞条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶基因型；

将所述第一代双基因杂合子小鼠进行相互交配，得到第二基因型小鼠，其中，所述第二基因型小鼠的基因型为调节性T细胞条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶/载脂蛋白基因型；

将所述第二基因型小鼠喂养预设时长后，得到所述自身免疫性肝病动物模型。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述第一基因型小鼠的模型构建方法包括：

将零代小鼠与野生鼠交配，得到条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶基因型杂合子小鼠；其中，所述零代小鼠是通过人工将目标受精卵植入母鼠体内得到的，所述目标受精卵中包括向导核糖核酸、靶向腺苷-磷酸活化蛋白激酶和内切核酸酶；

将所述条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶基因型杂合子小鼠进行相互交配，得到条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶基因型纯合子小鼠；

将所述条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶基因型纯合子小鼠与带有调节性T细胞谱系特异转录因子的小鼠进行交配，得到调节性T细胞条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶基因型杂合子小鼠；

将所述调节性T细胞条件性敲除腺苷-磷酸活化蛋白激酶基因型杂合子小鼠进行相互交配，得到所述第一基因型小鼠。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述靶向腺苷-磷酸活化蛋白激酶是通过对腺苷-磷酸活化蛋白激酶进行特异性标识修饰得到的。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述通过对腺苷-磷酸活化蛋白激酶进行特异性标识修饰，包括：

通过染色体位点特异性重组酶系统，将所述腺苷-磷酸活化蛋白激酶的两端各放置一个特异性标识序列，得到所述靶向腺苷-磷酸活化蛋白激酶。

7.根据权利要求3所述的方法，其中，所述载脂蛋白基因型小鼠的模型构建方法包括：

靶向敲除小鼠胚胎干细胞中的载脂蛋白基因，得到靶向细胞；

将所述靶向细胞注入工具鼠的囊胚中，得到嵌合体；

将所述嵌合体按照预设交配方式进行繁殖，得到所述载脂蛋白基因型小鼠。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述将所述嵌合体按照预设交配方式进行繁殖，得到所述载脂蛋白基因型小鼠，包括：

将所述嵌合体先进行回交，再进行自交的方式得到中间代的纯合子小鼠；

将所述中间代的纯合子小鼠进行回交，得到所述载脂蛋白基因型小鼠。

9.根据权利要求3所述的方法，其中，所述将载脂蛋白基因型小鼠与第一基因型小鼠按照预设比例进行交配，得到第一代双基因杂合子小鼠，包括：

将所述载脂蛋白基因型小鼠和所述第一基因型小鼠按照预设比例，放置在层流动物房内进行交配，得到所述第一代双基因杂合子小鼠，其中，所述层流动物房中的温度为18～22℃，所述层流动物房中的湿度为40％～60％。

10.根据权利要求3所述的方法，其中，所述预设比例包括以下任意一种：

雄性载脂蛋白基因型小鼠的数量与雌性第一基因型小鼠的数量的比例为1∶2；

雄性第一基因型小鼠的数量与雌性载脂蛋白基因型小鼠的数量的比例为1∶2。