[发明专利]一种检测肺炎支原体毒素的引物组、试剂盒及其方法在审
| 申请号： | 202210958677.0 | 申请日： | 2022-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN115786542A | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 苑鑫;刘威;王福生;方云;牛文凯;邹大阳;秦艳红;杨宁;张丽冰 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军总医院第五医学中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12N15/11;C12R1/35 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 黄明光 |
| 地址： | 100071 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 肺炎 支原体 毒素 引物 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种检测肺炎支原体毒素的引物组，其特征在于，所述引物组包括：外引物F3、B3，内引物FIP、BIP和环引物LF、LB；
所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述外引物B3的核苷酸序列如SEQID No.2所示；所述内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述环引物LB的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
2.一种检测肺炎支原体毒素的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物组。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组中外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物LF以及环引物LB的摩尔比为(1～3)：(1～3)：(5～10)：(5～10)：(3～6)：(3～6)。
4.如权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，还包括Bst DNA聚合酶、Tris-HCl缓冲液、KCl、(NH4)2SO4、Tween-20、甜菜碱、MgSO4、dNTPs。
5.一种非诊断目的的检测肺炎支原体的检测方法，其特征在于，利用如权利要求1所述的引物组进行Lamp检测。
6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将待测样品DNA和权利要求1所述引物组混合反应，观察或检测混合反应的溶液变化。
7.如权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述反应体系包括引物组2.6μL，8U/μl的Bst DNA聚合酶1μL，Tris-HCl 78.8μg、KCl 16.401μg、(NH4)2SO4 33μg、100％的Tween-20 0.025μL、甜菜碱2.343mg、MgSO4 24μg、10mmol/L的dNTPs 3.5μL，由蒸馏水补加至总反应体系为25μL。
8.如权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述引物组包括5pmol外引物F3 0.1μL、5pmol外引物B3 0.1μL，40pmol内引物FIP 0.4μL、40pmol内引物BIP 0.4μL，20pmol环引物LF0.8μL、20pmol环引物LB 0.8μL。
9.如权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述混合反应条件为60～70℃反应30～70cycles，0.5～2min/cycle。
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