[发明专利]一种检测肺炎支原体毒素的引物组、试剂盒及其方法

说明书

本发明提供了一种快速检测肺炎支原体毒素的引物组、试剂盒和方法，属于体外诊断技术领域。本发明检测肺炎支原体毒素的引物组可精准的扩增出目的基因片段，特异性强，经该引物组结合检测方法最低检测浓度为0.4986pg/μL，灵敏度高；与荧光定量PCR检测方法相比，操作简便快捷。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，尤其涉及一种检测肺炎支原体毒素的引物组、试剂盒及其方法。

背景技术

肺炎支原体(mycoplasma pneumonia，MP)是社区获得性肺炎的首位致病菌。支原体是一种介于病毒与细菌之间，可自由通过细菌滤器的病原微生物，其构造简单，无细胞壁。MP目前致病机制尚不十分明了。

CARDS毒素是目前发现的MP唯一致病毒素。CARDS毒素引起的机体炎性反应和病理损害与MP引起的基本相似，因此推测CARDS毒素可能是MP的主要致病机制。CARDS毒素不但引起急性炎性损害，还与气道的慢性炎症性疾病如哮喘等有关。因此CARDS毒素对于指导MP感染的诊断、治疗和预后评估都有重要意义。但目前临床尚无CARDS毒素的快速检测方法。因此亟待开发一种CARDS毒素的基因或蛋白快速检测技术，将有助于提高MP感染的诊断和治疗率，并为哮喘的防范提供很好的指导作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测肺炎支原体毒素的引物组、试剂盒及其方法，该引物组和试剂盒在检测肺炎支原体毒素方面灵敏度高、特异性强，该方法操作简便、快捷。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种检测肺炎支原体毒素的引物组，所述引物组包括：外引物F3、B3，内引物FIP、BIP和环引物LF、LB；

所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述环引物LB的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

本发明提供了一种检测肺炎支原体毒素的试剂盒，包括所述的引物组。

优选的，所述引物组中外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物LF以及环引物LB的摩尔比为(1～3)：(1～3)：(5～10)：(5～10)：(3～6)：(3～6)。

优选的，所述试剂盒还包括Bst DNA聚合酶、Tris-HCl缓冲液、KCl、(NH₄)₂SO₄、Tween-20、甜菜碱、MgSO₄、dNTPs。

本发明提供一种非诊断目的的检测肺炎支原体毒素的检测方法，利用所述的引物组进行Lamp检测。

优选的，所述检测方法包括如下步骤：将待测样品DNA和所述引物组混合反应，观察或检测混合反应的溶液变化。

优选的，所述反应体系包括引物组2.6μL，8U/μl的Bst DNA聚合酶1μL，Tris-HCl78.8μg、KCl 16.401μg、(NH₄)₂SO₄ 33μg、100％的Tween-20 0.025μL、甜菜碱2.343mg、MgSO₄24μg、10mmol/L的dNTPs 3.5μL，由蒸馏水补加至总反应体系为25μL。

优选的，所述引物组包括5pmol外引物F30.1μL、5pmol外引物B3 0.1μL，40pmol内引物FIP 0.4μL、40pmol内引物BIP0.4μL，20pmol环引物LF0.8μL、20pmol环引物LB 0.8μL。