[发明专利]ADGRA2突变基因及其作为肺癌骨转移标志物的应用

说明书

本发明首次提供了一种特定的人ADGRA2突变基因，该突变基因是由于野生型ADGRA2基因发生g.18084_18086insGCT突变而形成的，突变所在基因片段的具体序列如SEQ ID NO：2所示。ADGRA2基因发生g.18084_18086insGCT突变的肺癌患者其骨转移风险高，其可以做为肺癌骨转移的有效可靠分子标志物；本发明还提供了基于数字PCR的ADGRA2突变基因的检测试剂盒和检测方法，这些可以简便有效应用到肺癌患者骨转移的解析中，有助于肺癌患者骨转移的早发现和早干预，也可以为肺癌骨转移的机理解析提供线索。

技术领域

本发明涉及医学分子生物学领域，具体涉及ADGRA2突变基因、ADGRA2突变基因检测及其做为分子标志物在肺癌转移中的应用。

背景技术

肺癌是呼吸系统中最常见的恶性肿瘤。目前普遍认为吸烟、空气污染和遗传与肺癌高发密切相关，然而临床上对肺癌发生发展的诸多分子机制尚未完全明确。肺癌早期多无明显症状，然而其恶性程度高、容易发生转移，有超过一半的患者确诊时已是晚期且常伴随转移，此外采用手术和放化疗等各种方式治疗后也仍然会出现大量的复发和转移，导致难以实现完全根治，因此复发和转移是肺癌致死的主要原因（90%以上），其5年生存率不足15%。

肺癌到晚期可出现各个不同脏器的转移，常易发生胸腔内播散和远处转移，如双肺、胸膜、骨、脑、肝和肾上腺转移，其中脑和骨属于肺癌最常见的转移部位。20%-65%肺癌患者会出现脑转移，自然平均生存时间只有1-2个月，预后十分差。目前手术、放疗及化疗等治疗手段的综合应用可以在一定程度上延长肺癌脑转移患者的生存期、显著改善其生活质量。肺癌骨转移可引起骨痛、病理性骨折、椎体压缩或变形、脊髓压迫等症状，严重降低了患者的生活质量，其中位生存期仅为6个月-10个月。肺癌骨转移应采用以全身治疗为主的综合性治疗，在原发病的系统治疗的基础之上，针对骨转移可以采取多学科综合治疗模式，有计划、合理地制定个体化综合治疗方案，减少或延缓骨转移并发症及骨相关事件的发生，将有助于提高患者的生活质量。

肺癌的发生、发展和转移涉及多个基因的时序性突变，它是一种多基因、多途径和多阶段的复杂疾病，在其发生、发展和转移过程中经历了一系列的分子事件，其中存在某些重要基因的突变发生，导致其持续性的发展变化，并不断进行突变的累积导致进行性的恶化。这些关键节点的突变基因可以认为是肺癌的驱动基因，控制着其生长、进展、侵袭与转移。临床上现行的一些血清学和影像学指标都具有一定的滞后性，往往是出现明显症状后才能检测到异常，且灵敏度和特异性往往不高。针对肺癌的转移必须从分子水平上揭示其关键基因突变，才能提供相应的分子标志物，及早评估其转移的风险和部位，以便尽快进行干预和治疗，最终有效提高患者的生存期和生活质量。

然而由于肺癌的复杂性，其转移的分子机制至今尚未得到解析。针对于此，本发明以肺癌转移家系为切入点进行探究，恶性肿瘤家系是指一个家族中有多名成员发生一种或几种解剖位置相同的恶性肿瘤，具有家族性发病的特点，然而家系成员间的临床表型和发展可能存在差异，因此就可以在相似的遗传背景下，通过家系中肿瘤的差异表征解析其背后的分子本质，有助于找出关键的控制基因，所以肺癌转移家系是探究肺癌转移的良好模型。本发明首先收集肺癌脑转移和骨转移并存的肺癌家系，通过对转移患者群体的全外显子组测序分析，归类出相似分子类群的群体，找出脑转移和骨转移类群的差异基因突变，再通过突变基因的人群分布和表达、动物模型模拟以及临床预测这几方面进行综合验证，从而揭示了特定ADGRA2突变基因是肺癌脑转移和骨转移的关键决定基因，并提供了基于数字PCR的检测试剂盒和检测方法。本发明提供的ADGRA2突变基因在此之前尚未见报道，并且其对于肺癌患者转移的临床意义和价值在此之前尚未被揭示。

发明内容

本发明首次提供了特定的人ADGRA2突变基因，其可以做为肺癌脑和骨转移的分子生物标志物，同时提供了基于数字PCR的ADGRA2特定突变基因检测试剂盒和检测方法，这些可以应用到肺癌患者脑和骨转移的风险预测中，也可以为肺癌脑和骨转移的机理解析提供线索。